1. Определение количества клеток в молоке

а) Метод Прескотта и Брида

Чистое предметное стекло кладут на лист бумаги, расчерченный на квадраты со стороной 1 см. Пробу молока (секрета) тщательно смешивают, затем микропипеткой наносят на каждый квадрат предметного стекла 0,005 мл молока (секрета) и тщательно рас­пределяют на площади квадрата. Мазок высушивают на воздухе, фиксируют метиловым спиртом или спирт-эфиром (лучше изобутиловым спиртом) в ванночке при вертикальном положении мазка, окрашивают 15—20 минут по Романовскому—Гимза (на 1 мл ди­стиллированной воды 1—2 капли краски). Вместо краски Романов­ского—Гимза можно окрашивать мамки по Ныомансу раствором следующего состава: спирт абсолютный — 50 мл, хлороформ —• 50 мл, ледяная уксусная кислота —20 м-л, фуксии основной— 0,1 г, метиленовая синь— 1,0 г.

Краски растворяют в смеси спирта и хлороформа, нагретой до 50°. После охлаждения до комнатной температуры в раствор до­бавляют ледяную уксусную кислоту и выдерживают в течение 18 часов, а затем используют для окрашивания. После окрашива­ния препарат сушат и промывают трехкратно теплой водой (37— 40°). Мазок тщательно высушивают и просматривают под микро­скопом.

В каждом мазке рассматривают по 100 полей зрения. Подсчи­танное число клеток умножают на коэффициент для пересчета с учетом объектива и окуляра (для советского микроскопа МБ-1 при объективе 90 и окуляре 7 этот коэффициент равен 6260, при окуляре 10—10 200, при окуляре 15—33 200).

б) Камерный метод

Подсчету клеток в камере препятствуют жировые шарики, кото­рые необходимо предварительно растворить синтанолом ДС-10.

К 100 мл 0,9%-ного раствора хлористого натрия добавляют 1% формальдегида, 12,5% этилового спирта и 1% синтанола ДС-10 и нагревают при 60° в течение 20 минут. После растворения добав­ляют 1 % насыщенного спиртового раствора основного фуксина и фильтруют через бумажный фильтр. В связи с тем, что при дли­тельном хранении краситель из раствора выпадает, его добавляют к солюбилизирующему раствору непосредственно перед применени­ем. Раствор солюбилизатора в герметическом сосуде сохраняется длительное время.

Для подсчета клеток в пробирки, содержащие 10 мл солюбилизирующего раствора с красителем, добавляют 0,1 мл молока, тща­тельно перемешивают и прогревают 30 минут на водяной бане при 80°. После перемешивания каплю жидкости вносят под покровное

стекло счетной камеры Фукса—Розенталя (при отсутствии послед­ней можно использовать камеру Горяева, Тома, Предтеченского, Бюркера и т. д.). Подсчет клеток ведут под микроскопом при объ­ективе 10Х—20X. В поле зрения на прозрачном фоне видны четко прокрашенные клетки, легко поддающиеся подсчету.

2. Определение каталазы с помощью всплывания диска

Из хроматографической бумаги марки Ф-1 готовят диски диа­метром 12 мм. Делают 3%-ный раствор перекиси водорода на М/15-фосфатном буфере рН 7,2 (готовится в день проведения про­бы).

Анатомическим пинцетом захватывают бумажный диск и по­гружают его в тщательно смешанную пробу молока. Для удаления излишков молока диск поворачивают в вертикальное положение и, притрагиваясь к стенкам пробирки, как бы вытирают его. После этого диск погружают в раствор перекиси водорода, которого на­ливают 5 мл в пробирку размером 60X16 мм. Время, прошедшее от момента погружения диска в раствор до всплытия его на поверх­ность, отмечают по секундомеру.

При малом содержании клеток в молоке (до 100 тыс./мл) время всплытия диска равно 1—5 минутам, иногда больше.

При увеличении содержания лейкоцитов в молоке свыше 200 тыс./мл диск всплывает за 30-—35 секунд. При заболевании мас­титом диск всплывает за 3—7 сек или моментально. Данный метод определения каталазы можно использовать при проведении массо­вых исследований проб молока от коров непосредственно в хозяй­ствах.