6.3. Для зберігання замороженої сперми на пунктах штучного

осіменіння рекомендується використовувати посудини Дьюара марок

СДС-30-2, Харків-34Б та інші, у яких регулярно контролюють рівень

рідкого азоту полімерним щупом, на нижньому кінці якого наносять

поділки через 5 см, і не допускають зниження його нижче 1/3 об'єму

посудини (додаток 4).

При маршрутно-кільцевій або внутрішньогосподарській формі

організації штучного осіменіння та осіменінні тварин приватного

сектору для транспортування сперми використовують посудини Дьюара

малого об'єму: СДС-5, СДС-2, Харків-5 та інші. Дозаправку рідким

азотом цих посудин проводять щоденно.

6.4. Розміщення обладнання в лабораторії. Посудину Дьюара зі

спермою розміщують у лабораторії зліва від робочого столу, на

відстані не ближче 1 м від опалювальних пристроїв.

На столі ставлять термостат біологічний (ближче до посудини

Дьюара), стерильну підставку для інструментів, пайєтоввід,

шприц-катетер, затискач Корцанга, катетер полістироловий з

ампулою, пінцет (довжиною 25-30 см), ножиці, скальпель, шприц

ветеринарний, мікроскоп з підігрівальним столиком, предметними і

покривними скельцями, скляні палички, дві склянки з притертими

кришками для стерильних марлевих серветок і спиртових тампонів

(зволожених 96град.-ним спиртом), термометр, рушник, 4 склянки з

притертими кришками об'ємом по 100 мл (три для 3,0%-ного розчину

натрію цитрату і одна - для 70 град.-ного розчину спирту) при

застосуванні візо-цервікального способу.

Забороняється зберігати медикаменти та дезинфікуючі речовини,

що не використовуються на пункті.

7. Технологія розморожування сперми бугаїв-плідників

Розморожування сперми бугаїв-плідників проводиться в такому

порядку:

7.1. Підготовка лабораторного обладнання та приладів для

розморожування сперми.

Для розморожування сперми у формі відкритих гранул у

термостат біологічний наливають 600-700 мл дистильованої води,

включають в електромережу і нагрівають до температури 38 (+-) 0,5

град. C. Температура стабілізується через 30-40 хвилин. Беруть

ампулу із 2,9%-ним розчином натрію цитрату, струшують, надрізають,

знезаражують поверхню спиртовим тампоном і дегерметизують або

використовують стерильний пеніциліновий флакон із 1 мл 3%-ного

розчину натрію цитрату, який ставлять у відповідне гніздо штативу.

Розчин натрію цитрату нагрівається до температури +38 град. C за

2-3 хвилини. Для цієї самої мети використовують активатор

замороженої сперми універсальний (АЗСУ-3, -4), у якому температура

стабілізується протягом 3-4 хвилин. Після чого приступають до

безпосереднього розморожування сперми.

Для розморожування сперми в облицьованих гранулах із

термостата виймають штатив, а в пайєтах, крім цього, установлюють

температуру води на +35 град. C.

7.2. Розморожування сперми, замороженої у формі відкритих

гранул. Технік штучного осіменіння одягає білий халат, захисні

окуляри і рукавиці, відкриває кришку посудини Дьюара, ставить її

на край лабораторного столу. Лівою рукою бере за стержень посудини

із спермою необхідного бугая, піднімає її на рівень нижньої

третини горловини посудини Дьюара, фіксує, а правою дістає одну

дозу сперми стерильним, охолодженим до -196 град. C спеціальним

пінцетом і швидко переносить її в підготовлену для розморожування

ампулу (флакон) із нагрітим до +38 град. C 3%-ним розчином натрію

цитрату, а посудину із спермою швидко занурює в рідкий азот

посудини Дьюара, яку закриває кришкою.

Експозиція розморожування гранули об'ємом 0,2 мл становить

30-40 сек. Для прискореного розморожування гранул ампулу (флакон)

обертають у пальцях навколо осі, не підіймаючи з гнізда приладу до

повного розморожування сперми. Після цього флакон (ампулу)

виймають із термостата, витирають насухо рушничком (серветкою) і

ставлять у штатив.

Прискорене розморожування відкритих гранул проводять також

двоступеневим способом за допомогою приладу УДО-1. Для чого

виймають гранулу із рідкого азоту і поміщають у лійку пристрою, де

вона підігрівається до температури -100 град. C, а потім

автоматично подається в ампулу із 3%-ним розчином натрію цитрату

для кінцевого розморожування. При цьому швидкість розморожування

сперми в зоні температури рекристалізаційних процесів

(-50...-60 град. C) підвищується у 1,5-2 рази.

7.3. Спермодозу, розфасовану в пайєту або облицьовану

гранулу, дістають із ємкості охолодженим пінцетом, струшують для

видалення залишків рідкого азоту протягом 2-3 сек. і занурюють у

воду термостата до повного її розморожування, яке настає у пайєті

об'ємом 0,25 мл - через 20 сек., а 0,5 мл - через 40 сек. при

температурі +35 град. C. Експозиція розморожування облицьованих

гранул становить 10-12 сек. при температурі +38 град. C.

7.4. При тривалому (понад 5 років) збереженні пайєт чи

облицьованих гранул їх розморожують у 3%-ному розчині натрію

цитрату. Після розморожування пайєту (облицьовану гранулу)

виймають із водяної бані, витирають поверхню стерильною серветкою

і кладуть на іншу стерильну серветку на лабораторному столі.

7.5. При надшвидкому розморожуванні сперми в облицьованих

гранулах останню опускають в спеціальний стакан з отвором у дні,

який заповнений киплячою водою.

Одночасно стакан піднімають над поверхнею водяної бані. При

цьому вода витікає через отвір за 7 сек. Гранулу виймають пінцетом

із стакана, витирають і дезінфікують.

Одночасно розморожують лише по одній спермодозі, яку

використовують негайно (не пізніше 10-15 хвилин).

8. Оцінка якості сперми бугаїв-плідників

8.1. На пункт штучного осіменіння повинна надходити тільки

якісна сперма. Тут її оцінюють за рухливістю сперміїв, при потребі

визначають живучість при температурі +38 C.

Розморожена сперма, незалежно від технології її

заморожування, повинна мати такі показники:

рухливість сперміїв - не нижче 4 балів;

кількість сперміїв у дозі з прямолінійним поступальним рухом

(далі - ППР) - не менше 15 млн.;

живучість сперміїв у водяному термостаті при температурі 38

(+-) 0,5 град. C - не менше 5 годин.

Сперму високоцінних бугаїв-поліпшувачів допускають до

використання з кількістю сперміїв у дозі з ППР не менше 10 млн.