біот
.docx1. Скласти опорний конспект за допомогою засобів текстового редактора MSWORD та ресурсів Інтернету, у якому:
викласти інформацію, щодо методів отримання трансгенних рослин та тварин.
Методи трансгенезу у тваринництві:
Метод мікро»їнєкції. Суть методу мікроін'єкції полягає у введенні розчину генних конструкцій в чоловічій пронуклеус зигот. Зазвичай ін'еціруют 1-2 ПКЛ розчину ДНК в концентрації, що відповідає 1000 копій в 1 ПКЛ мікроін'екціонного розчину. При цьому виходять з того, що кількість 1000 копій / ПКЛ приблизно відповідає концентрації X нг / мкл, де X - довжина генної конструкції в тисячах парах нуклеотидів (т.п.н).
Про успішне виконання мікроін'єкції судять по збільшенню обсягу пронуклеусів в 1,5-2 рази [Брем та ін, 1995]. У ембріонах мишей кроликів, овець і кіз пронуклеус досить добре візуалізуються під мікроскопом при збільшенні Х400 без виконання будь-яких додаткових маніпуляцій. Що стосується ембріонів свиней і великої рогатої худоби, то внаслідок наявності в цитоплазмі темних ліпідосодержащіх гранул визначення місця розташування пронуклеусов в них утруднено.
Використання ретривірусних векторів. Ретровіруси - сімейство еукаріотичних вірусів, генетичний матеріал яких представлений одноланцюжковою РНК. Інфекція починається з взаємодії ретровірусу з клітинною мембраною і зв'язування поверхневого білка ретровірусу (env) зі специфічним білком-рецептором. Проникнення ретровірусу в клітину відбувається за допомогою мікропіноцітоза. В одних вірусів кор, що складається з білка gag, РНК-залежної ДНК-полімерази (реверсивної транскриптази), інтегрази і двох копій ретровірусної РНК, переноситься в ядро, де і відбувається транскрипція, а в інших вірусів транскрипція здійснюється безпосередньо в цитоплазмі. Зворотня транскрипція вірусної РНК в двухцепочечную ДНК здійснюється за допомогою ферменту реверсивної транскриптази, що є частиною комплексу ферментів кора. У ході транскрипції відбувається дуплікація послідовностей на 5 'і 3' кінцях ретровірусу. Якщо транскрипція має місце в цитоплазмі клітини, то дволанцюжкова ДНК вірусу транспортується в ядро, де відбувається її циркуляція з подальшою інтеграцією однієї або декількох копій в геном клітини. Така інтегрована ДНК клітини хазяїна форма існування вірусного геному отримала назву провірусу.
Інфікування клітин ретровірусами найчастіше за все не позначається на їхній життєдіяльності. Однак якщо інтеграція провірусу сталася поблизу клітинних протоонкогенів, то можлива їх активація і, як наслідок, загибель клітин. Порушення життєздатності клітин. Може мати місце і в тому випадку інтегріраціі провірусу в діючий клітинний ген (наприклад, пухлинні гени-супресори). Найбільш часто використовуваними ретровірусними векторами являютя вектори на основі ретровірусів миші типу С (вірус лейкемії миші) Такі векторні системи складаються з двох компонентів: векторної конструкції та лінії клітин-пакувальниці.
Перевагою використання ретровірусних векторів для отримання трансгенних тварин є те, що до 100% оброблених ембріонів можуть бути успішно інфіковані ретровірусами. Недоліком застосування ретровірусних векторів є їх обмежена ємність (розмір вставки не повинен перевищувати 8 000 п. н. Крім того, в результаті сплайсингу з ретровірусів вирізаються інтроннние послідовності, які як і інші дистальні або проксимальні послідовності грають важливу роль в ефективній експресії генів у трансгенноих тварин [Palmiter et ai, 1991]. До недоліків лікування ретровірусними векторів слід так само віднести придушення експресії трансгенів in vivo внаслідок інактивації вірусних промоторів в клітинах, наприклад, за допомогою а-і у-інтерферонів, що діють на вірусні LTR [Ghazizadeh et ai, 1997] . Однак дана проблема може бути вирішена за допомогою включення в ретровірусну конструкцію внутрішніх промоторів або використанням нового покоління ретровірусів, що містять модифіковані ділянки контролю експресії, такі як внутрішній рибосомних сайт (IRES) [Salen, 1997] і тетрациклінова регуляторна система [lida et ai, 1996] .
Метод пересадки ядер клітин, культивованих in vitro.
Ще одним способом отримання трансгенних ссавців є використання трансформованих генними конструкціями клітинних ліній. З цією метою можуть бути використані як стовбурові клітинні лінії, так і соматичні клітини, культивовані in vitro.
Ліпосоми як переносники днк Векторами для перенесення генних конструкцій у ембріональні лінії ссавців можуть служити ліпосоми [Rottmann et al, 1985], однак опосередкований ними перенесення генів не отримали широкого розповсюдження
Методи трансгенезу рослин:
Мікроін'єкції ДНК. Аналогічний методу мікроін'єкцій тварин клітин. Цей метод можна розглядати як найбільш універсальний. Ефективність трансформації рослинних клітин - 10-20% незалежно від типу вектора. Трансформація видоспецифічність, можливе перенесення генів в будь-яку рослину;
· електропорація. Метод заснований на підвищенні проникності біомембран за рахунок дії імпульсів високої напруги. В результаті молекули ДНК проникають в клітини через пори в клітинній мембрані;
· Упаковка в ліпосоми. Це один з методів, що дозволяють захистити екзогенний генетичний матеріал від руйнування нуклеазами рослинної клітини. Ліпосоми - сферичні тільця, оболонки яких утворені фосфоліпідами;
· метод біологічної балістики. Метод заснований на напиленні ДНК-вектора на найдрібніші частинки вольфраму, якими потім бомбардують клітини. Бомбардування здійснюється за допомогою балістичної гармати за рахунок перепаду тиску. Частина клітин гине, а ті, що вижили клітини трансформуються, потім їх культивують і використовують для регенерації рослин.
2. Знайти у мережі Інтернет реферат на тему «Генномодифіковані рослини» і оцінити реферат з позицій наукового змісту, повноти викладення матеріалу.
У рефераті використані застарілі джерела, матеріал сприймається легко, наявність наукових та латинських термінів, наявність розгорнутого плану та його дотримання, інформація цікава.
3. Створити список ключових слів.
Гмо, трансгенез, ДНК, ген, рекомбінанта, ГМО, гібрид, клон, вектор, регенерація, диференціація, селекція, плазміда, меристема, генна інженерія, модифікація, мутація.
4. http://ua-referat.com/%D0%93%D0%B5%D0%BD%D0%B5%D1%82%D0%B8%D1%87%D0%BD%D0%BE_%D0%BC%D0%BE%D0%B4%D0%B8%D1%84%D1%96%D0%BA%D0%BE%D0%B2%D0%B0%D0%BD%D1%96_%D1%80%D0%BE%D1%81%D0%BB%D0%B8%D0%BD%D0%B8
http://studopedia.org/4-63962.html
http://um.co.ua/8/8-7/8-7196.html
http://ua-referat.com/%D0%9E%D1%82%D1%80%D0%B8%D0%BC%D0%B0%D0%BD%D0%BD%D1%8F_%D1%82%D1%80%D0%B0%D0%BD%D1%81%D0%B3%D0%B5%D0%BD%D0%BD%D0%B8%D1%85_%D1%82%D0%B2%D0%B0%D1%80%D0%B8%D0%BD
http://studopedia.ru/17_110172_tehnologiya-oderzhannya-transgennih-tvarin.html
http://bukvar.su/kulinarija/153294-Sozdanie-transgennyh-produktov.html