26. Взятие материала для микроскопического исследования при дерматомикозах.

Взятие материала для микроскопического исследования при дерматомикозах осуществляется двумя способами: с предварительным обогащением; без предварительного обогащения. При взятии с предварительным обогащением будущий участок исследуемой кожи заклеивается до получения соскоба на трое суток медицинским пластырем. Соскоб осуществляется специальным шпателем. После получения соскоба материал заливают 15% раствором щелочи и подогревают в течение 15-30 минут до растворения оболочек кератомикоцитов, затем микроскопируют. Микроскопическому исследованию также можно подвергнуть волосы из очага поражения и вокруг него.

Оснащение рабочего места: скальпель, эпиляционный пинцет, бумажные пакеты, чашки Петри, пробирки, предметные и покровные стекла, микроскопы, едкий кали.

Техника взятия материала: для исследования используют волосы, чешуйки, ногти, иногда гнойное отделяемое, мокроту, желудочное содержимое, мочу. Инструментами для взятия материала служат эпиляционный пинцет, скальпель или скарификатор, анатомический пинцет.

При взятии материала с волосистой части головы больного усаживают так, чтобы волосы хорошо были освещены. Внимательно осматривают всю поверхность головы, а в участке облысения подрывают чешуйки, которые захватывают вместе с пораженным волосом. При поражении гладкой кожи вместе с чешуйками берут и пушковые волосы; чешуйки и покрышки пузырьков соскабливают шпателем или скальпелем с периферических участков очагов поражения. При исследовании ногтей с помощью острой бритвы или скальпеля производят соскабливание чешуек с поверхностных очагов поражения и срезают пластинки из более глубоких слоев пораженного ногтя.

Отобранные волосы и чешуйки помещают на предметное стекло и прибавляют каплю 30% раствора КОН, подогревая не до кипения под пламенем горелки. Затем препарат накрывают покровным стеклом. В связи с тем, что ногти труднее поддаются воздействию щелочи, их предварительно заливают на сутки 30% раствором КОН.

27. Приготовление препарата бледной спирохеты для исследования в темном поле зрения.

Нативный препарат берется с поверхности эрозивных и язвенных высыпаний и пунктата сопутствующего бубона после обработки вышеуказанных физраствором (путем наложения компресса). Затем прокаленной платиновой петлей различными методами (раздражение, скарификация, пункция) из сифилитических элементов и лимфатических узлов берут межтканевую жидкость (серум). Метод исследования в темном поле зрения применяют чаще, чем окрашивание препарата, так как он простой, быстрый, а также дает возможность рассмотреть характерные движения трепонем, одинакового размера завитки и плавности очертаний и движений. В темном поле (при темнопольном микроскопировании) будут ясно видны светлые бледные неокрашенные трепонемы, постоянно находящиеся в движении. Исследование проводится непосредственно после забора материала, так как бледная трепонема чувствительна к высыханию и воздействию физических факторов и факторов внешней среды.

При приготовлении препарата для исследования в темном поле зрения следует пользоваться тонкими и ровными предметными стеклами, желательно белого стекла, предварительно обезжиренными в смеси Никифорова (спирт и эфир в равных частях) или же хорошо прокипяченным и вымытом. На центр предметного стекла платиновой петлей предварительно наносят каплю стерильного физиологического раствора величиной с конопляное зерно и затем рядом помещают такое же количество серума, добытого из исследуемого объекта. Помещенные рядом капли серума и физиологического раствора быстро перемешивают платиновой петлей и накрывают покровным стеклом, которое затем придавливают концом петледержателя так, чтобы не оставить жирного пятна. Желательно, чтобы серум не доходил до края стекла, что обеспечивает небольшую толщину препарата, в котором рассматривание спирохет более удобно. Разводить пунктат лимфатических узлов физиологическим раствором не рекомендуется, так как это ведет к снижению количества бледных спирохет. Кроме того, пунктат неизбежно разводится жидкостью, которая остается после кипячения в канюле иглы и стенках шприца. Пунктат из шприца нужно помещать весьма осторожно, медленно передвигая поршень шприца, так как при быстром передвижении поршня жидкость разбрызгивается, загрязняет предметное стекло мелкими каплями материала, что становится опасным для исследователя. После того как препарат приготовлен, его помещают на столик микроскопа с уже вставленным конденсором для темного поля зрения. Перед тем как положить препарат, на верхнюю линзу конденсора наносят пипеткой каплю дистиллированной или обычной водопроводной воды. Безусловно следует избегать образования при этом пузырьков воздуха. После того как препарат помещен на столик микроскопа и установлен источник света, тубус микроскопа с объективом под контролем глаза осторожно опускают до верхней поверхности препарата. Затем поворотами зеркала необходимо добиться яркого освещения поля зрения; тубус микроскопа поднимают до тех пор, пока не появится темное поле со светящимися на нем твердыми частицами. При этом можно увидеть:

1. Все темное поле усеяно массой мельчайших светящих точек - броуновское молекулярное движение.

2. Бледная спирохета - она слабо преломляет свет и имеет серебристый оттенок. Движения ее обычно поступательные и сгибательные, то быстрые, то медленные.

3. Нейтрофилы - округлые, яркие, зернистые образования.

4. Лимфоциты - меньше нейтрофилов, серовато-темные и тускло светящиеся.

5. Эритроциты - вид темных, правильно круглых элементов, окаймленных светящимся нимбом.