
- •Лекция № (материалы к занятию №10). Тема: Аналитические основы клинической лабораторной диагностики. Электрофорез
- •Хроматография
- •Фотометрические методы исследования
- •Корпускулярно-волновая природа света
- •Классификация фотометрических методов анализа
- •Колориметры и фотометры
- •Спектрофотометры
- •Характеристики и примеры абсорбциометрических приборов
- •Нефелометрический и турбидиметрический анализ Нефелометрический анализ
- •Турбидиметрический метод анализа
- •Флуориметрическии анализ
Характеристики и примеры абсорбциометрических приборов
Основное назначение современных абсорбциометрических приборов — определение концентрации растворов с исследуемым веществом посредством сравнения величин поглощения или пропускания световой энергии исследуемого раствора и раствора известной концентрации.
В настоящее время на рынке фотометрических приборов и в практических лабораториях можно встретить большое разнообразие различных по конструкции и характеристикам колориметров, фотометров и спектрофотометров.
Приборы могут отличаться:
по форме представления информации (в единицах светопропускания, в единицах оптической плотности, в единицах концентрации или любых других значениях, по которым произведена калибровка);
по способу построения и хранения калибровочных значений (автоматическое, ручное, длительное или краткосрочное);
по способу подачи в прибор исследуемого раствора (проточная кювета, коммутируемая кювета, кюветы специальной конструкции, например, 96-луночный планшет и т.д.);
по конструкции оптической системы (одноканальные и многоканальные);
по виду источника излучения световой энергии (разнообразные лампы накаливания с телом накала из вольфрама, импульсные, газоразрядные лампы, светодиоды, лазеры).
Существуют и другие отличительные признаки, так или иначе влияющие на параметры и эксплуатационные характеристики приборов.
Основные параметры и характеристики колориметров.
1. Спектральный диапазон. Он характеризует спектральный диапазон длин волн, в которых работает прибор. Диапазон задается в нанометрах. В большинстве случаев фотометры (колориметры) работают в спектральном диапазоне 340—700 нм. Диапазон работы спектрофотометров, как правило, значительно шире (200— 950 нм). Так как фотометры, в отличие от спектрофотометров, формируют заданную длину волны дискретно с помощью полосовых фильтров, то каждому фотометру придается набор светофильтров.
Применяются светофильтры, в основном, двух типов:
светофильтры, изготовленные из цветного стекла (окрашенных жидкостей, окрашенной пластмассы или других селективно поглощающих материалов);
интерференционные светофильтры, принцип действия которых основан на использовании явления интерференции в тонких многослойных пленках.
2. Динамический диапазон измерения. Энергия светового потока, прошедшая через раствор, измеряется с помощью фотоприемников, при этом сила тока, возникающего в фотоприемнике, прямо пропорциональна интенсивности светового потока, падающего на фотоприемник.
Приборы выдают значение оптической плотности (D) в Беллах (Б). Иногда вместо термина оптическая плотность (D) используют термин абсорбция (А) или термин экстинкция (Е).
Диапазон измерения может быть представлен и диапазоном светопропускания (в %).
3. Максимальный и минимальный объем фотометрируемого раствора. Максимальный объем определяется объемом измерительной кюветы, а минимальный допустимый объем раствора, при котором еще возможно получение гарантированных результатов измерений, определяется, помимо конструкции кюветы, возможностью приемно-усилительного тракта прибора.
Современные фотометрические приборы могут работать с минимальными объемами раствора в диапазоне 10—500 мкл.
4. Градуировка прибора.
Многие современные приборы имеют процессоры, запоминающие устройства, которые позволяют автоматизировать процесс построения градуировочных характеристик самим прибором.
Возможности некоторых приборов ограничены объемами памяти, что, в свою очередь, ограничивает количество (набор) стандартных растворов различных концентраций, необходимых для градуировки прибора.
Приборы более высокого класса, имеющие энергонезависимое запоминающее устройство, позволяют сохранять информацию, в том числе и градуировочные характеристики, в течение длительного времени (нескольких месяцев) даже при отключении прибора от сети.
5. Способы отображения и регистрации информации.
В общем случае фотометры могут выдавать информацию в светопропускании, в оптической плотности, в единицах концентрации исследуемых растворов или в тех единицах, в которых указаны значения калибровочных (стандартных) растворов.
В качестве отображения информации в приборах используются стрелочные, цифровые и алфавитно-цифровые индикаторы. Информация регистрируется принтерами самых различных конструкций. Большинство приборов имеет связь с внешней ЭВМ, чаще всего через стандартный интерфейс.