
- •Лекция № (материалы к занятию №10). Тема: Аналитические основы клинической лабораторной диагностики. Электрофорез
- •Хроматография
- •Фотометрические методы исследования
- •Корпускулярно-волновая природа света
- •Классификация фотометрических методов анализа
- •Колориметры и фотометры
- •Спектрофотометры
- •Характеристики и примеры абсорбциометрических приборов
- •Нефелометрический и турбидиметрический анализ Нефелометрический анализ
- •Турбидиметрический метод анализа
- •Флуориметрическии анализ
Фотометрические методы исследования
Многие определения в клинической лабораторной диагностике основаны на измерении лучистой энергии, испускаемой, поглощаемой, рассеиваемой или отражаемой в определенных условиях. Клиническая лабораторная диагностика оперирует узким диапазоном лучистой энергии, чаще всего видимым светом, реже ультрафиолетовым и инфракрасным.
Фотометрия-измерение количества поглощаемого света, независимо от длины волны. В КЛД практически используются только узкие полосы-определенные диапазоны длин волн, веделенные с помощью светофильтров (фильтровые фотометры) или с помощью более сложных устройств-призм или решеток или их комбинацией (спектрофотометры).
Фотоэлектроколориметры (колориметры), фотометры, спектрофотометры, нефелометры, флуориметры, турбидиметры, рефрактометры, хемилюминометры и построенные на их основе специализированные приборы и анализаторы образуют класс фотометрических приборов.
Таблица 1 Цветовые зоны видимого спектра
Цвет |
Пределы λ, нм |
Фиолетовый |
390—450 |
Синий |
450—480 |
Голубой |
480—510 |
Зеленый |
510—550 |
Желто-зеленый |
550—585 |
Желтый |
575—585 |
Оранжевый |
585—600 |
Красный |
620—800 |
Своим названием этот класс приборов обязан фотометрическому принципу детектирования•результата: измерение энергии светового потока с помощью фотодетекторов, преобразующих световую энергию в электрический сигнал.
Корпускулярно-волновая природа света
Являясь одним из видов электромагнитного излучения, свет представляет собой электромагнитные волны. Они распространяются со скоростью около 3 108 м/с (в вакууме). Волновая теория света объясняет такие явления, как, например, преломление света, дифракция и некоторые другие. К электромагнитным волнам можно приме нить следующие характеристики: длина волны λ, частота колебаний v — число колебаний в единицу времени. Человеческий глаз способен воспринимать только часть всего спектра электромагнитных излучений — видимый свет, частота колебаний которого соответствует длинам волн от 380 нм до 750 нм.
Спектральный диапазон современных фотометрических приборов, работающих в практических медицинских лабораториях, как правило, ограничивается диапазоном видимого света (VIS) и ближнего ультрафиолета (UV).
Кроме явлений, подтверждающих волновую природу электромагнитного излучения, известны и такие явления, связанные с распространением света, как поглощение и рассеяние. Они свидетельствуют о том, что свет — это поток, материальных частиц (корпускул), названных. фотонами. Энергия излучения прямо пропорциональна его частоте и обратно пропорциональна длине волны.
Функцию распределения излучаемой электромагнитной энергии в зависимости от частоты или длины волны называют спектром излучения.
Излучение энергии на одной частоте и соответствующей ей длине волны называется монохроматическим излучением.
Прохождение потока электромагнитной энергии через какую-либо жидкую среду сопровождается такими явлениями, как поглощение (уменьшение энергии потока), рассеяние и некоторые другие, специфика которых применительна к построению приборов для медицинских лабораторных исследований.
Поток световой энергии, переносимый через единицу площади, называют интенсивностью потока световой энергии