
- •17. Общая характеристика методов определения лекарственной чувствительности микроорганизмов (метод серийных разведений, диско-диффузионный, е-тест).
- •Определение чувствительности бактерии к антибиотикам методом серийных разведении антибиотика в питательной среде
- •Диско-диффузионный метод (ддм)
- •18. Основные этапы проведения тестирования антибиотикочувствительности, интерпретация результатов исследования.
- •Ускоренные методы определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам
- •Классификации антибактериальных препаратов
- •22. Механизмы возникновения резистентности микроорганизмов к антибактериальным препаратам.
- •23. Нормальная микробиота человека, ее значение для макроорганизма. Зоны заселения, стерильные биотопы.
- •Значение для макро/о
- •Нормальная микрофлора кишечника человека
- •Дисбактериоз
Нормальная микрофлора кишечника человека
Кишечная палочка - 106 - 107
Споровые анаэробы - 103 - 105
Лактобациллы - 106 и выше
Бифидобактерии - 107 и выше
Патогенная и условно патогенная микрофлора
Staphylococcus - до 103
Enterococcus - до 103
Streptococcus - до 103
Candida albicans - до 103
Proteus mirabilis - 102 - 103
Proteus vulgaris - 102 - 103
Патогенные микробы- семейство кишечных, Salmonella, Shigella, Yersinia - 0
Кишечная палочка со слабыми ферментативными свойствами до10%
Гемолизирующая кишечная палочка - 0
Лактозо-негативные энтеробактерии, cloacae - 103
Условно патогенные Грам-отрицательные микроорганизмы - 102 - 103
Klebsiella pneumoniae, enterobacter aerogenes, oxytoca, agglomerans - до 103
Listeria monocytogenes, providencia rettgeri, alcalifaciens, stuartii - до 102
Aeromonas, pasteurella, citrobacter freundii, diversus, hafnia alvei - до 102
Дисбактериоз
На состав микробных сообществ различных полостей организма влияют самые разнообразные факторы: состав и качество пищи, курение и употребление алкоголя, нормальная перистальтика и своевременное опорожнение кишечника и мочевого пузыря, качество пережёвывания пищи и даже характер трудовой деятельности (сидячий или иной). Однако наибольшее воздействие оказывают заболевания, патогенез которых включает изменения физико-химических свойств эпителиальных поверхностей и приём антимикробных препаратов. Стойкие нарушения микробных ценозов называют дисбактериозами (дисмикробиоценозами). Среди них, безусловно, превалируют поражения микрофлоры кишечника.
Видовой состав "патологического" микробиоценоза, так же как и скорость колонизации, и продолжительность персистирования составляющих его микроорганизмов в кишечнике индивидуальны, зависят от состояния микроэкологической системы и организма хозяина. Бактерии, в норме не характерные для данного микробного сообщества, кроме повышенной инвазивной способности отличаются от аутофлоры и тем, что способствуют возникновению различных нарушений в нормальном протекании метаболических процессов в кишечнике. Они также не способны осуществлять ряд важных физиологических функций, присущих представителям нормальной микрофлоры.
Следовательно, изменения в микробиоценозах пищеварительного тракта, как правило, служат предвестником отклонений в клинико-физиологическом статусе организма хозяина. Со временем дисбактериоз проявляет себя клиническими местными симптомами, а затем и общими нарушениями, которые отягощают течение различных заболеваний человека и затрудняют их лечение.
Гастриты, дуодениты, язвенная болезнь, изменения моторной и пропульсивной способности кишечника (колиты с диареей или запором, энтериты с синдромом мальабсорбции), коагулопатии, гипер- и гипохолестеринемия, острая мезентериальная ишемия, ревматоидный артрит, злокачественные новообразования толстой кишки и молочных желез, нарушение менструального цикла, кариес, мочекаменная болезнь, портальная системная энцефалопатия, заболевания печени, анемия новорожденных и т.д. - вот неполный перечень тех нозологических форм и клинических синдромов патологии человека, в которых дисбиотические изменения в кишечнике и других биотопах организма человека являются одним из патогенетических факторов заболевания.
К контингентам или группам "риска" можно отнести следующие категории пациентов:
- Стационарные больные, длительно получающие антибактериальную, гормональную, лучевую и/или химиотерапию.
- Пациенты с жалобами со стороны органов пищеварения.
- Больные с проявлениями аллергозов и астеновегетативного синдрома.
- Дети с патологией различных органов и систем.
Для этих групп необходимо параллельное исследование микробного, иммунного, биохимического и т.д. статуса.
А. В настоящее время основным и наиболее распространенным методом лабораторной диагностики дисбактериоза кишечника остается бактериологическое исследование кала пациента, считающееся классическим методом. Обязательными компонентами данного исследования должны быть количественные методики и многовекторность (направленность на выделение многих видов и вариантов микрофлоры). Результаты исследования сопоставляют с данными о нормальном составе микрофлоры конкретного биотопа, клинической картиной и возрастом пациента. Показания для бактериологической диагностики дисбактериоза кишечника — длительно протекающие инфекции и расстройства, при которых не удаётся выделить патогенные энтеробактерии; затяжной период реконвалесценции после перенесённой кишечной инфекции, дисфункции ЖКТ на фоне или после проведённой антибиотикотерапии или у лиц, постоянно контактирующих с антимикробными препаратами. Исследования также следует проводить у больных с болезнями злокачественного роста, страдающих диспептическими расстройствами, у лиц, подготавливаемых к операциям на органах брюшной полости, а также у недоношенных или травмированных новорождённых и при наличии бактериемии и гнойных процессов, трудно поддающихся лечению (язвенные колиты и энтероколиты, пиелиты, холециститы и др.).
Б. Посевы изучают на наличие патогенных микроорганизмов и на нарушение соотношений микрофлоры.
Для обогащения в качестве обязательных рекомендуют использовать среды
• Мюллера-Хитона,
• селенитовый бульон,
• магниевую среду.
Для культивирования:
• среды Плоскирева, Эндо и Левина (одна из них градиентная),
• КА,
• среду Цейсслера,
• среду Сабуро,
• среду Блаурокка или тиогликолевый бульон и др.
Патогенные бактерии определяют на средах с антибиотиками; исследования на дисбактериоз проводят для получения основных критериев и показателей. Результаты исследования следует считать объективными при анализе роста изолированных колоний, у которых можно изучить морфологию и подсчитать их общее количество на чашку Петри. При сплошном росте анализ следует повторить, производя высев из больших разведении. Факультативные бактерии культивируют 24-48 ч при 37°С, бифидобактерии — 48 ч, анаэробы и бактероиды — 4-5 сут в анаэростате, посевы на среде Сабуро — 96 ч при 28-30°С. После идентификации производят пересчёт содержания микроорганизмов каждой таксономической группы на 1 г исследуемого материала.
В. Следует учитывать, что кишечная микрофлора человека - весьма лабильная система, подверженная колебаниям в зависимости от многих факторов, как эндогенных (нервный статус, пища, температура тела и т.п.), так и экзогенных (время года, атмосферные колебания и т.п.). Необходимо отличать истинный дисбактериоз от дисбактериальных реакций (сдвиги в составе микрофлоры незначительны либо кратковременны и не требуют специфической коррекции). Отличию так называемых "дисбиотических реакций" от истинного дисбактериоза способствует выполнение 2 - 3-кратных исследований с интервалом не менее 14 дней. В первом случае сдвиги в составе микрофлоры кишечника непродолжительны и исчезают через 5 - 7 дней без какого-либо лечения. При истинном дисбактериозе нарушения микробного ценоза обычно коррелируют с клиническими проявлениями, и их нормализация достаточно длительна (20-30 сут). При выдаче результатов следует указать на наличие или отсутствие патогенной микрофлоры и дать состав присутствующих микроорганизмов.
Г. При наличии дисбактериоза необходимо указать следующие параметры:
1. Содержание общего количества Escherichia coli, полноценных в ферментативном отношении.
2. Наличие гемолитических Escherichia coli (в %).
3. Наличие прочих условно-патогенных бактерий (в %).
4. Наличие ассоциаций грамотрицательных бактерий, плазмакоагулирующего стафилококка и других ассоциаций.
5. Наличие бактерий рода Proteus.
6. Наличие грибов рода Candida.
7. Наличие или отсутствие бифидобактерии, лактобактерий, бактероидов и прочих в минимальных разведениях фекалий.
8. Наличие ассоциаций аэробных и анаэробных бактерий.
Д. Повторные исследования. Следует отразить имеющиеся позитивные или негативные сдвиги; при обнаружении патогенной микрофлоры необходимо изучить её чувствительность к антибактериальным препаратам или бактериофагам. При определении чувствительности следует отдавать предпочтение антибиотикам узкого спектра действия для возможно более селективного подавления патогенов.