11. Реакция торможения гемагглютинации (ртга).

Несмотря на своё название, принцип реакции во многом аналогичен РН вирусов, так как основан на способности At связывать различные вирусы и нейтрализовать их, лишая возможности агглютинировать эритроциты. Визуально этот эффект и проявляется в «торможении» гемагглютинации. РТГА применяют при диагностике вирусных инфекций для выявления специфических антигемагглютининов и идентификации различных вирусов по их гемагглютининам, проявляющим свойства Аg.

При серодиагностике вирусных инфекций к сериям двукратных разведении сыворотокк больного, взятых в начале болезни и спустя 10-14 дней в объеме 0,25 мл, добавляют по 0,25 мл стандартного вирусного диагностикума. После часовой экспозиции при комнатной температуре в каждую пробирку (лунку) доливают по 0,5 мл 1% взвеси куриных эритроцитов. Через 30 - 60 мин в обоих рядах определяют последние разведения сывороток, в к-рых отмечено торможение (отсутствие) гемагглютинации. В случае нарастания титра Аt в 4 раза и более дают положительный ответ, в остальных случаях - отрицательный.

Для типирования вирусов готовят серии двукратных разведении стандартной типовой с-ки в объеме 0,25 мл, к каждому разведению добавляют равный объем иссл. вирусной суспензии активностью в 4 гемагглютинирующие ед. (дозы), выдерживают при комнатной температуре 1 ч и доливают по 0,5 мл 1% взвеси куриных эритроцитов. Учет осуществляют так же, как и в предыдущем варианте. Вирус признают идентичным сыворотке, если РТГА достигает титра или 1/2 титра стандартной сывороткики.

К тому и др. варианту ставят 3 контроля: с-ки, вируса, эритроцитов.

ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ТИТРЫ At: (если в опыте титры такой же или выше->подверждается диагноз)

Шигеллы Флекснера 1:200

Шигеллы Зонне 1:100

Полиомиелит 1:8 (вакцинация эффективна)

Клещевой энцефалит 1:1600

Дифтерийный токсин 100DLM (Dosis Letalis Minimus - наименьшее количество токсина, который при определенном способе заражения вызывает гибель 95% восприимчивыхживотных определенного вида, веса, возраста в течение заданного времени)

У вирусов если титр 10 ( в -7 степ) проводят идентификацию, если нет, продолжают накопление.

Окраска по Граму: (сложная окраска)

1. На фиксированный препарат наносят генциан-фиолетовый (2мин)

2. Р-р Люголя (йод содержащий) – 1-2 мин

3. Спирт этиловый 96% р-р – 20сек

4. Промывают водой

5. Водный р-р фуксина (3мин)

6. Промывают водой, сушат, микроскопируют.

Химизм:

Гр «+»: Образуется соединение из генциан-фиолетового, йода (р-р Люголя), солей Са и Mg (в слое тейхоевых кислот) -> соединение плохо растворимо в спирте -> клеточная стенка НЕ обесцвечивается спиртом -> сине-фиолетовое окрашивание

Удержанию краски способствуют малые поры и толстый слой гликана клеточной стенки.

Пример: Стафилококки, стрептококки, коринебактерии дифтерии, микобактерии туберкулеза.

Гр «-» : Соединение не образуется -> клеточная стенка легко обесцвечивается спиртом и докрашивается фуксином -> красное окрашивание

Пример: гонококки, менингококки, кишечная палочка.

Ошибка при окраске: состоит в переобесцвечивании или недообесцвечивании мазка спиртом. В первом случае грам+ бактерии могут утрачивать первоначальную окраску генциановым фиолетовым и приобретать красный цвет (характерный для грам- бактерий) в результате последующей докраски мазка фуксином.

Во втором случае грамотрицательные бактерии могут сохранять сине-фиолетовый цвет генцианового фиолетового.