9. Реакцию флокуляции применяют для определения активности антитоксических сывороток и титра анатоксинов.

Титром анатоксина называется количество иммуногенных единиц (ИЕ) в 1 мл. Титр анатоксина определяют по реакции флокуляции со стандартной антитоксической сывороткой с известным титром.

Феномен флокуляции — помутнение — внешнее проявление образования комплекса экзотоксин (анатоксин) + антитоксин в оптимальных количественных соотношениях ингредиентов.

Реакция применяется:

- для определения специфической активности токсинов (анатоксинов) по стандартной антитоксической сыворотке (МЕ/мл), которая обозначается Ыглез ?1осси!а1юп15 (и — порог флокуляции) или иммуногенной единицей (ИЕ). и — это то количество токсина (анатоксина), которое даёт интенсивную, ^-инициальную» флоккуляцию с 1МЕ сыворотки;

- для титрования антитоксических сывороток по известному анатоксину или токсину (метод Рамона). Активность сывороток выражается в МЕ/мл принимается то минимальное количество сыворотки, которое даёт интенсивную «инициальную» флокуляцию с Ш анатоксина (токсина). Например, эта реакция применяется для определения активности дифтерийного, столбнячного, ботулинического, гангренозного анатоксинов и титрования противодифтерийной, противостолбнячной, протиаоботулинической, прогивогангренозной и др. антитоксических сывороток.

10. Заражение куриных эмбрионов.

Исследуемый материал вводят в аллантоисную и амниотическую полости, хорион-аллантоис-ную оболочку или желточный мешок куриного эмбриона. Перед заражением скорлупу яйца над воздушной камерой обрабатывают 70% спиртом, обжигают на пламени, смазывают 2% йодной настойкой, вторично протирают спиртом и обжигают (Заражение проводят в асептических условиях).

Для заражения в аллантоисную полость в скорлупе над воздушной камерой (границы ее заранее обводят карандашом при просвечивании яйца) проделывают небольшое отверстие с помощью ножниц, скальпеля или специального буравчика. Шприцем вводят 0,1—0,2 мл вируссодержащего материала на глубину 2—3 мм ниже границы воздушной камеры. Отверстие в скорлупе заливают расплавленным парафином.

Вскрытие зараженных эмбрионов производят в сроки максимального накопления вируса (через 48—72 ч инкубации при 37°С). После обработки спиртом и 2% йодной настойкой скорлупу рассекают ножницами немного выше очерченной карандашом границы воздушной камеры, наклоняя яйцо так, чтобы избежать попадания скорлупы в полость. Скорлупу отбрасывают, осторожно снимают ее оболочку и рассматривают хорион-аллантоисную оболочку вокруг места заражения, отмечая наличие или отсутствие очагов поражения—геморрагии, белесоватых очагов. Затем пастеровской пипеткой прокалывают хорион-аллантоисную оболочку в участке, свободном от сосудов, и отсасывают аллантоисную жидкость. После этого извлекают хорион-аллантоисную оболочку, которую дважды промывают изотоническим раствором хлорида натрия, помещают в чашку Петри и отмечают на черном фоне наличие специфических поражений.

Постановка РГА. После вскрытия куриного эмбриона аллантоисную жидкость отсасывают и разливают в пробирки или лунки плексигласовой пластины в объеме 0,5 мл (для контроля берут 0,5 мл такой же жидкости незараженного эмбриона). Затем добавляют по 0,2 мл 1% суспензии отмытых куриных эритроцитов и выдерживают при комнатной температуре. Результаты реакции учитывают через 40 мин после оседания эритроцитов:

++++ выраженная гемагглютинация — тонкая пленка из склеившихся эритроцитов на дне пробирки, имеющая вид зонтика;

+++ наличие просветов в пленке;

++ наличие пленки с фестончатыми краями из склеившихся эритроцитов;

+ хлопьевидный осадок эритроцитов, окруженный зоной комочков агглютинированных эритроцитов; — резко очерченный осадок эритроцитов, неотличимый от контроля.

Наличие гемагглютинации в опытных пробирках при ее отсутствии в контрольных указывает на содержание вируса в исследуемой жидкости.

Цветная реакция (проба): изменение цвета индикатора питательной среды при сохранении жизнеспособности клеток (с красного на желтый)