Реакция непрямой, или пассивной, гемагглютинации (рнга/рпга).

Антиген предварительно адсорбируют на инертных монодисперсных частицах или клетках, например на эритроцитах, готовят эритроцитарный диагностикум. Такие нагруженные антигеном эритроциты склеиваются под действием иммунной сыворотки, содержащей антитела к данному антигену (РПГА). Реакция отличается высокой чувствительностью и позволяет выявлять сравнительно небольшие концентрации антител в исследуемых сыворотках. При необходимости обнаружения антигена в исследуемом материале эритроциты предварительно нагружают специфическими антителами и также ставят РПГА.

При помощи РПГА определяют полные (бивалентные) антитела.

Неполные (моновалентные, блокирующие) антитела выявляются проба с антиглобулиновой сывороткой, которая получила название реакцией Кумбса.

Реакция агглютинации Видаля (серологич.Диагностика тифа и паратифа)

основанна на обнаружении в сыворотке крови людей агглютининов, которые появляются в конце 1-й —начале 2-й недели заболевания, и на изучении динамики нарастания и длительности сохранения антител.

Реакция ставится одновременно с 4 антигенами: О- и Н-брюшнотифозными (О-, Н Ag Salm.typhi), А- и В-паратифозными (OH Ag Salm.paratyphy) диагностикумами.

Брюшнотифозные монодиагностикумы применяются для установления стадии болезни, так как содержание О- и Н-антител в разные ее периоды неодинаково.

О-антитела накапливаются в разгар заболевания и исчезают к моменту выздоровления.

Н-антитела появляются к концу заболевания и сохраняются у переболевших в течение длительного времени.

У людей, вакцинированных против брюшного тифа и паратифов, также наблюдается положительная реакция Видаля, причем в довольно высоком титре, поэтому «инфекционный Видаль» удается отличить от «прививочного» только по нарастанию титра агглютининов у больных в процессе заболевания.

Реакцию Видаля ставят в четырех рядах пробирок по 7 пробирок в каждом ряду, из которых 5 опытных и 2 контрольные. Для, контроля каждого диагностикума в пробирки вносят по 1 мл изотонического раствора хлорида натрия, в который добавляют 2 капли диагностикума. В контрольной пробирке с 1 мл сыворотки (без диагностикума) не должно быть хлопьев. При спонтанной агглютинации реакция не учитывается. Диагностический титр реакции Видаля равен 1 : 200.

5.ИФА (иммуноферментный анализ/метод)

1) Ag/At+ At/Ag

смотря что исследуют (At или Ag), на дно лунки помещают соответствующий материал,т.е. если исследуют сыворотку на At, первым на дно лунки помещают специфический Ag на который будут фиксироваться искомые At и , наоборот, если исследуют материал на наличие Ag, на дно лунки первым помещают специфические At.

2) помещают в термостат

3) Отмывание исследуемого материала. Если At и Ag не совпадают, они не зафиксируются в лунке и последующим веществам (меченным At и S(субстрату)) не будет поверхности для прикрепления

4)Нанесение Ate- энзимные, меченые ферментами At (ферменты: пероксидаза хрена, щелочная фосфатаза)

5) Отмывание Ate, если комплекса At+Ag не образовалось Ate, тоже полностью отмоются.

6) Нанесение S - субстрат

ПРИМЕР ГЕПАТИТ:

1) Диагностический Ag на дно

2) +At из исследуемого материала (сыворотки больных) -> в термостат -> отмываем

3) +Ate – антиглобулиновая сыворотка -> в термостат

4) Отмывание Ate

5) S

Темный цвет -> проба +, прозрачный -> проба -

ПРИМЕР ТУБЕРКУЛЕЗ:

1) Диагностические At на дно лунки

2) + Ag исследуемого материала -> в термостат -> отмываем

3) + Ate -> термостат ->

4) Отмывание Ate

5) S

Темный цвет -> проба +, прозрачный -> проба -

6. Реакция преципитации в геле (агаре).

Чашки заливают агаром, в котором вырезают несколько луночек на равном расстоянии друг от друга. В центральную лунку вносят сыворотку, содержащую антитела, в остальные — различные испытуемые антигены или один и тот же антиген в различных разведениях. При диффузии реагентов в агаре в зонах оптимальных соотношений на месте встречи антигена и антител образуются мутные полосы —дуги преципитации. В случае постановки реакции преципитации с различными разведениями антигена можно установить титр преципитирующей сыворотки—максимальное разведение антигена, которое дает преципитацию с данной сывороткой.

Одна из разновидностей реакции преципитации в геле позволяет определять токсигенность исследуемых бактерий (например, дифтерийной палочки) с помощью антитоксической сыворотки. Для этого в чашку Петри на питательную среду помещают полоску стерильной фильтровальной бумаги, пропитанную антитоксической противодифтерийной сывороткой. Затем чашку подсушивают в термостате и засевают испытуемыми культурами в виде штрихов, перпендикулярных к полоске бумаги, на расстоянии 0,6-0,8 см от ее края. В качестве контроля используют заведомо токсигенную культуру. Чашки инкубируют при 37°С в течение суток. При наличии токсигенной культуры в месте взаимодействия токсина с антитоксином образуются линии преципитации в виде дуг

7. Реакция кольцепреципитации.

Ставится в узких пробирках (диаметр 0,5 см), в которые вносят по 0,2-0,3 мл преципитирующей сыворотки. Затем пастеровской пипеткой медленно, по стенке, держа пробирку в наклонном положении, наслаивают 0,1-0,2 мл раствора антигена. Пробирки осторожно переводят в вертикальное положение. Учет реакции производят через 1—2 мин. В случае положительной реакции в первой пробирке на границе между сывороткой и исследуемым антигеном появляется преципитат в виде белого кольца. В остальных (контрольных) пробирках преципитат не образуется

8. Ботулизм

Опасность представляют консервированные в анаэробных условиях продукты, без тщательной термической обработки: рыбные, мясные, овощные, грибные. Кроме того, опасными являются сыры твердых сортов, окорок, сырокопченые колбасы, рыба соленая и копченая (так как в толще продукта создаются анаэробные условия); в продуктах при Т28-350С происходит прорастание спор и синтез токсина (повышенная концентрация поваренной соли не предотвращает токсинообразование).

Ботулотоксин является самым сильным бактериальным токсином – 1 мкг достаточно для гибели взрослого человека; ботулотоксин разрабатывается как биологическое оружие.

Токсин имеет различные антигенные свойства: А,В,С,Д,Е,F; антитела вырабатываются к определенному серотипу токсина.

Выделение возбудителя возможно чаще всего из продукта с соблюдением облигатных анаэробных условий;

В продуктах, рвотных массах, крови больного обнаруживают ботулотоксин и идентифицируют в реакции нейтрализации на белых мышах (вводят токсин и 1 из Сывороток типа А, В, С, Е, F -> если мышка погибла значит введеные At не смогли нейтролизовать токсин; если осталась жива – реакция нейтрализации прошла успешно и сыворотка подходит к этому токсину)