3. Определение чувствительности бактерий к антибиотикам методом дисков.

Исследуемую бактериальную культуру засевают газоном на питательный агар в чашке Петри, после чего на его поверхность пинцетом помещают на равномерном расстоянии друг от друга бумажные диски, содержащие определенные дозы разных антибиотиков. Посевы инкубируют при 37°С до следующего дня. По диаметру зон задержки роста культуры стафилококка судят об ее чувствительности к соответствующим антибиотикам. При зоне задержки роста диаметром до 10 мм культура расценивается как малочувствительная, а свыше 10 мм —как высокочувствительная. В том случае, если диски пропитаны разными концентрациями одного и того же антибиотика, можно установить наименьшую дозу препарата, к которой чувствительна исследуемая бактериальная культура.

Определение чувствительности бактерий к антибиотикам методом серийных разведений.

Данным методом определяют минимальную концентрацию антибиотика, ингибирующую рост исследуемой культуры бактерий. Вначале готовят основной раствор, содержащий определенную концентрацию антибиотика (в мкг/мл или ЕД/мл) в специальном растворителе или буферном растворе. Из него готовят все последующие разведения в бульоне (в объеме 1 мл), после чего к каждому разведению добавляют 0,1 мл исследуемой бактериальной суспензии, содержащей 10(в6) —10(в7степени) бактериальных клеток в 1 мл. В последнюю пробирку вносят 1 мл бульона и 0,1 мл суспензии бактерий (контроль культуры). Посевы инкубируют при 37°С до следующего дня, после чего отмечают результаты опыта по помутнению питательной среды, сравнивая с контролем культуры. Последняя пробирка с прозрачной питательной средой указьшает на задержку роста исследуемой культуры бактерий содержащейся в ней минимальной ингибирующей дозой антибиотика

4. РСК – реакция связывания комплемента (Пример Р-ия Вассермана на сифилис):

1) Сыворотка больного (At)– инактивированная и разведенная физ.р-ром 1:5 (0,9% NaCl)

2) Аg – специфический и неспецифический

3) Комплемент – титруют перед постановкой реакции

4) Гемолитическая сыворотка – в тройном титре

5) Эритроциты барана – 3-5% взвесь

6) физиол.р-р

Механизм:

Опытная система состоит из Аg (диагностич.) + At (сыворотка больного)+ С (комплемент)

Индикаторная система: At (Гемолитич.сыворотка)+ Ag (эритроциты барана)

Если происходит гемолиз, значит в опытной системе At+Ag+C -> комплемент расходуется полностью и на индикационную систему его не хватает -> специфический Ag совпадает с At в сыворотке больного -> диагноз подтверждается.

Реакция Вассермана

ставят одновременно с тремя антигенами:

1) специфическим, содержащим антигены возбудителя—разрушенные ультразвуком трепонемы,

2) неспецифическим — кардиолипиновым (экстракт бычьего сердца с лецитином и холестерином);

3) неспецифическим — спиртовым экстрактом липоидов из мышцы сердца быка с холестерином.

Исследуемую сыворотку разводят 1:4 и разливают в 4 пробирки по 0,1 мл.

Первый период сифилиса является серонегативным и характеризуется отрицательной реакцией Вассермана. У 50% больных реакция становится положительной не ранее чем через 2—3 нед после появления твердого шанкра. Во втором и третьем периодах сифилиса частота положительных реакций достигает 75—90%. После проведенного курса лечения реакция Вассермана становится отрицательной.

Для диагностики поздних и латентных форм сифилиса можно использовать реакцию Вассермана с ликвором, применив те же антигены, что и для реакции с сывороткой больного.