1. Методы диагностики стафилококковых инфекций:

Бактериологический метод:

• Патологический материал зависит от клинических проявлений и исследуется с учетом количества возбудителя (гной, экссудат, раневое отделяемое, перевязочный материал, слизь из носоглотки, мазки из зева; при подозрении на сепсис — кровь)

• При исследовании лекарственных препаратов готовится образец не менее 1 грамма;

• Элективная среда – солевой агар (6-10% хлорида натрия)

• Основные видовые дифференцирующие признаки:

1. Гемолитическая активность

2. Плазмокоагулирующая активность

3. Лецитиназная активность

• При определении источника инфекции – фаготипирование (чувствительность к типовым стафилококковым бактериофагам)

Бактериологическое исследование.

Исследуемый материал засевают петлей на чашки с кровяным агаром и ЖСА (желточно-солевым агаром) для получения изолированных колоний. Посевы инкубируют при 37°С. На следующий день исследуют выросшие колонии на обеих средах.

-На кровяном агаре отмечают наличие или отсутствие гемолиза.

-На ЖСА Staph, aureus образуют золотистые круглые выпуклые непрозрачные колонии. Вокруг колоний стафилококков, обладающих лецитиназной активностью, образуются зоны помутнения с перламутровым оттенком. Для окончательного установления вида стафилококка 2—3 колонии пересевают в пробирки со скошенным питательным агаром для получения чистых культур.

При подозрении на сепсис делают посевы крови больного. Из локтевой вены берут шприцем 5—10 мл крови и вносят в колбу с 50—100 мл сахарного бульона. Посевы инкубируют при 37°С в течение нескольких суток, периодически делая мазки для бактериоскопии и пересевы на кровяной агар в чашки Петри. При положительном результате выделяют чистую культуру стафилококка, которую идентифицируют по гемолитическому, лецитиназному, плазмокоагулазному, гиалуронидазному (подкожно вводят кролику взвесь микробов -> +реакция если появляется инфильтрат, затем некроз) признакам.

Для установления источника госпитальной инфекции выделяют чистые кульуры стафилококка от больных и бактерионосителей, после чего проводят их фаготипирование с помощью набора типовых стафилофагов, устанавливая идентичность фаготипов. Фаги разводят до титра, указанного на этикетке.

Каждую из исследуемых культур засевают на питательный агар в чашку Петри газоном, подсушивают, а затем петлей наносят по капле каждого фага на 22 квадрата (по числу фагов, входящих в набор), предварительно намеченных карандашом на дне чашки Петри. Посевы инкубируют при 37°С. Результаты оценивают на следующий день по наличию лизиса культуры в квадратах. Определение чувствительвочти стафилококка к антибиотикам.

Методы диагностики стрептококковых инфекций:

Бактериологический метод: патологический материал зависит от клинических проявлений и исследуется с учетом количества возбудителя

• Дифференцирующие признаки:

вид гемолитической активности

антигенные свойства (определяют в реакции агглютинации с групповыми и типовыми сыворотками)

Бактериологическое исследование.

Исследуемый материал засевают на кровяной агар в чашку Петри. После инкубации при 37°С в течение 24 ч изучают характер колоний и наличие вокруг них зон гемолиза. Из части материала, взятого из колоний, готовят мазок, окрашивают по Граму и микроскопируют. Для получения чистой культуры 2—3 колонии пересевают в пробирки со скошенным кровяным агаром и сахарным бульоном.

На кровяном агаре Str. pyogenes образуют мелкие, величиной с булавочную головку, мутноватые круглые колонии. В бульоне стрептококк в отличие от стафилококка дает придонно-пристеночный рост в виде хлопьев или зерен, оставляя всю среду прозрачной.

По характеру гемолиза на кровяном агаре стрептококки делят на три группы:

1) негемолитические;

2) альфа-гемолитические, или зеленящие, образующие зеленоватую зону частичного гемолиза;

3) бета-гемолитические, образующие вокруг колонии полностью прозрачную зону гемолиза.

Заключительным этапом бактериологического исследования является идентификация выделенной культуры по Ag свойствам. По данному признаку все стрептококки делят на серологические группы (А, В, С, D и т. д.). Серогруппу стрептококков определяют в реакции преципитации с полисахаридным приципитиногеном С, выделенным из исследуемой культуры, и сыворотками (обычно четырех наиболее распространенных серогрупп: А, В, С и D). Большинство патогенных для человека бета-гемолитических стрептококков относится к серологической группе А. По содержанию типоспецифических антигенов протеиновой природы бета-гемолитические стрептококки подразделяются на серовары, из которых 47 относятся к группе А. Серовар стрептококков определяют в реакции агглютинации. Развернутое серологическое исследование и типирование стрептококков проводят главным образом при эпидемиологическом обследовании. Выделенную культуру стрептококка проверяют на чувствительность к антибиотикам методом дисков.

При подозрении на сепсис делают посевы крови больного. Инкубируют посевы длительный срок (до 3 нед).