Выбор метода анализа

В качестве основных предварительных скрининговых методов для обнаружения средств, вызывающих одурманивание, используются химические (хромогенные, микрокристаллические реакции), иммунохимические методы (ИФА, РИА, ПФИА и др.) и тонкослойная хроматография.

В табл. приведены данные по чувствительности некоторых методов, используемых для обнаружения наркотических средств в моче.

В качестве подтверждающих методов исследования используются ГЖХ, ВЭЖХ, ГХ/МС. Подтверждающие методы должны быть выше или равными по чувствительности, чтобы уменьшить количество

ложноотрицательных результатов, но обязательно должны быть выше по специфичности, для того чтобы снизить количество ложноположительных результатов.

Таким образом, при выборе аналитического метода необходимо учитывать его преимущества и недостатки. В любом случае, даже при использовании самого чувствительного метода, результаты скрининга должны быть подтверждены аналитическими методами, основанными на других физико-химических принципах.

Методы анализа:

1. Предварительные.

2. Основные.

3. Специфические.

4. Единичные исследования.

5. Косвенные.

Предварительные:

- тесты – набор реактивов с простыми схемами;

- капельные реакции;

- ТСХ (отчасти);

- переносные детекторы (в аэропортах – МС(MS)-детекторы);

- использование служебных собак и др.

Первым двум методам принадлежит 90% предварительных исследований.

Основные:

- ТСХ;

- ГЖХ;

- ВЭЖХ;

- ЖХ;

- спектральные методы:

а) МС;

б) ИК;

в) УФ;

г) ЯМР;

- комбинированные:

а) ГЖХ + МС;

б) ВЭЖХ + МС.

Специфические:

- ЯМР – применим для определения некоторых характеристик, в частности – для контроля чистоты.

Единичные измерения:

- ISP + MS;

- ГЖХ + ИК.

Косвенные:

- «мокрая химия»;

- гравиметрия;

- титрование;

- кондуктометрия и т.д.

Существует также отдельная группа методов - сертификационные методы – это методы, по которым идёт сертификация и контроль качества исследуемого объекта (по ГФ). Это в основном:

1) «мокрая химия»;

2) спектроскопия (от части);

3) физико-химические методы (редко);

4) специализированные:

Любое исследование, в общем, и экспертиза, в частности, включает в себя по меньшей мере: один метод анализа, пробоподготовку, подтверждающий метод, сопоставление результатов с имеющимися данными и вывод.

Выбор метода пробоподготовКи

Методы анализа для различных объектов применяются одинаковые, все отличия в основном в пробоподготовке.

Пробоподготовка (ПП):

1. Частная (для метода).

2. Общая (для исследования).

Сколько существует образцов, методов анализа и веществ, столько и пробоподготовок. Общая ПП для исследования определяется типом объекта.

Типы ПП:

1. ПП для биообразцов;

2. ПП для образцов на носителях;

3. ПП для образцов, содержащих подконтрольные вещества;

4. ПП для объектов твердых и порошкообразных;

5. ПП для жидких образцов;

6. ПП для концентратов (т.е. нужно учитывать ВПО);

7. ПП для гелей, суспензий и т.д.

На стадии ПП образец очищается от загрязнений, которые не следует отбрасывать, так как они могут быть источником дополнительной информации. ПП – это стадия риска потерять анализируемое вещество и объект. Правильные результаты можно обеспечить только правильным ПП и правильным методом доинструментального анализа.

Для каждого объекта нужно предусмотреть:

- корректный отбор пробы;

- хранение пробы;

- подготовка пробы к экстракции;

- наличие эндо- и экзогенных веществ, влияющих на чистоту проведения эксперимента и на выбор метода.

На наличие эндо- и экзогенных веществ влияет:

• возраст;

• вес;

• пол;

• наличие эндогенных веществ в организме, имеющих такую же активность;

• диета;

• кинетические эффекты;

• болезни и другие факторы.

Биообразцы являются самым сложным объектом исследования, с остальными дело обстоит проще, анализ их проводится по сходным схемам.

Схемы к химико-токсикологическому анализу биологических объектов содержащих средства, вызывающие одурманивание

Жидкости с небольшим содержанием биологического материала (моча, промывные воды желудка, вода, вино, пиво, спирты, минеральная вода).

Подкисление образца конц. HCl и чеырёхкратная экстракция диэтиловым эфиром
Экстракт		Водный слой
Высушивание безв. Na2SO4, фильтрование, выпаривание		Подщелачивание NH4OH и четырёхкратная экстракция CHCl3
Остаток 1
(соединения кислотного		Экстракт		Водный слой
и нейтрального характера)				(отбрасывается
		Высуш. (Ост-ок 2)

Жидкости с заметным содержанием биологического материала (кровь, содержимое желудка, кишечника, чай, кофе, молоко, сиропы, супы).

Четырёхкратное разбавление пробы водой, подкисление HCl и экстракция диэтиловым эфиром (Vo : Vв = 10 : 1)
Экстракт						Водный слой
Двукратная реэкстракция в насыщенный раствор свежеприготовленного NaHCO3 (Vo : Vв = 1 : 1)						Подщелачивание конц. NH4OH и экстракция хлороформом (Vo : Vв = 4 : 1)
Эфирный слой				Водный слой		Водный слой		Хлороформный
						(отбрасывается)		слой
			Подкисление конц. HCl
			и экстракция					Осушивание
			диэтиловым эфиром					безв. Na2SO4,
			(Vo : Vв = 2 : 1)					фильтрование,
								упаривание
Осушивание				Осушивание
безв. Na2SO4,				безв. Na2SO4,				Остаток 3
фильтрование,				фильтрование,				(основные в-ва)
упаривание				упаривание
Остаток 1				Остаток 2
(слабокислые				(сильнокислые
и нейтральные				вещества)
Вещества)

Твердые вещества, являющиеся простыми соединениями или простыми смесями (таблетки, капсулы, сахар, соли, остатки «неизвестного» порошка и т.д.).

Обработка пробы (100 мг) этанолом (10 мл)
Фильтрат		Фильтрат
Обработка водой (10 мл)		Анализ экстракта подходящим
		методом (ТСХ, ВЭЖХ, ГХ и др.)
Фильтрование
Анализ экстрактов подходящим методом

Твердые вещества сложного смесевого состава (цветы, хлеб, жиры, масла, биологические (мускулы, мозг, печень, почки) и растительные ткани).

Схемы к анализу небиологических объектов содержащих средства, вызывающие одурманивание

А. Образцы на носителях:

Марки. Смыв с марок активных веществ проводится по строгим схемам с учётом минимизации попадания экзогенных красителей и веществ бумаги.

Марка

Экстракция и реэкстракция

Концентрирование

Дериватизация

Стандарт

Проба

Желатиновые пластинки и капсулы. Анализируются по аналогичной схеме.

Б. Образцы, косвенно содержащие подконтрольные вещества:

Инструментарий (шприцы, ложки, иглы и т.д.), купюры, поверхности. В основе анализа лежит смыв большим количеством растворителя, затем следуют:

Очистка

Концентрирование

Экстракция и реэкстракция

Концентрирование

Дериватизация

Стандарт

Проба

В. Объекты твёрдые и порошкообразные:

Схема анализа аналогична биообразцам, но с некоторыми нюансами, т.к. образец может быть:

1. чистым;

2. чистым, но смесевым;

3. чистым или смесевым с загрязнениями;

4. чистым, но с известным наполнителем;

5. чистым, с неизвестным наполнителем;

6. неизвестное вещество с очень малым содержанием (концентрацией) – самый сложный случай).

Г. Жидкие образцы:

Подходы при анализе жидких образцов аналогичны описанным выше, но упор необходимо ставить на жидкостно-жидкостную экстракцию и выбрать оптимальный способ концентрирования веществ.

Д. Концентраты:

Требования к анализу веществ те же, однако, особый упор нужно оказать на ПП. Качественный анализ существенных отличий не имеет, а при проведении количественного анализа необходимо учесть разбавление, требуемое методикой анализа (ВПО).

Е. Гели и суспензии:

Гели и суспензии представляют собой препараты пролонгированного действия. Основной трудностью при их анализе является избавление от матрицы.

Разрушение матрицы

Высушивание раствора, содержащего наркотические вещества

Экстракция и реэкстракция

И далее по обычной схеме

Концентрирование

Дериватизация

Стандарт

Проба

Лекция № 4.