13.Механизмы регуляции транскрипции. Примеры воздействия на процессы биосинтеза белка лекарственными препаратами.

Регуляция синтеза белка /Регуляция осуществляется на уровне транскрипции/

1.механизм включения-выключения (индукция-супрессия)

/Белки, у которых регулируется скорость синтеза, являются индуцибельными/

/Белки, у которых не меняется скорость синтеза, являются конститутивными/

[Регуляторные белки – репрессоры, связываются с оператором в транскриптоне и препятствуют работе РНК-полимеразе

Регуляторные белки – индукторы, связываются с оператором в транскриптоне и активируют работу РНК-полимеразы]

2.механизм усиления

/существуют особые участки ДНК, с которыми связываются гормоны, чаще стероидной природы, усиливающие транскрипцию/

3.механизм координированного усиления биосинтеза или координированного ослабления биосинтеза

/Например активные формы кислорода связываются с участками ДНК, где находятся гены, кодирующие все антиоксидантные ферменты/

14.Идентификация специфических последовательностей днк полимеразной цепной реакцией. Значение для медицины.

С другой стороны, количество ДНК в клетке невелико, поэтому необходим способ умножения (амплификации) изучаемой ДНК in vitro

Таким методом является полимеразная цепная реакция - ПЦР, которая позволяет амплифицировать ДНК или ее фрагмент в миллионы раз за несколько часов

Метод ПЦР

/Методом ПЦР осуществляют диагностику следующих заболеваний: ВИЧ –инфекции, гепатиты А, В, С, Д, цитомегаловирусную инфекцию, токсоплазмоз, хламидии, то есть многие вирусные и бактериальные инфекции./

ПЦР осуществляют в пробирке с помощью термостабильной ДНК-полимеразы при участии дезоксинуклезидтрифосфатов - субстратов и коротких олигонуклеотидных затравок – праймеров

• Праймер - короткие, длиной в 20-30 нуклеотидов одноцепочечные фрагменты ДНК, комплементарные 3’-концевым последовательностям копируемой ДНК-матрицы

Реакция происходит в несколько стадий:

Денатурация.

/Инкубационную смесь нагревают до 90;При этом происходит разрушение слабых связей в ДНК и из одной двухцепочечной молекулы образуются две одноцепочечные/

Гибридизация праймеров

/Температуру снижают до 50о; При этом происходит гибридизация цепей ДНК с праймерами/

Полимеризация

/Инкубационную смесь нагревают до 70о; При этой температуре полимераза удлиняет оба праймера с их 3’-концов; Праймеры дорастают до размеров матриц; В результате количество ДНК удваивается/

Метод основан на том, что первичная структура ДНК разных видов организмов различна

Подбирается последовательности, характерные для ДНК возбудителей болезни и подобрать такие праймеры, которые будут гибридизоваться с ДНК возбудителя, но не с ДНК человека

В этом случае продуктом амплификации будет ДНК только возбудителя, а не пациента.

15.Основные этапы синтеза белков генно-инженерным способом.

Первый этап синтеза белка генно-инженерным способом:

/введение в клетки микроорганизма рекомбинантной плазмиды; в отсутствии влияния повреждающих факторов/

Второй этап синтеза белка генно-инженерным способом:

/продукция белка культурой трансформированных клеток микроорганизма/

Третий этап синтеза белка генно-инженерным способом:

/выделение белка из культуры трансформированных клеток микроорганизма/