
- •Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования «воронежский государственный университет»
- •020201 Биология
- •1.2.1. Создание модели экспериментального ревматоидного артрита в тканях у экспериментальных животных
- •1.2.3.Определение интенсивности биохемилюминесценции
- •1.2.4. Приготовление буферных растворов
- •1.2.5. Определение активности ферментов
- •1.2.5.1. Методика определения активности глутатионредуктазы
- •1.2.5.2. Методика определения активности глутатионпероксидазы
- •1.2.5.3. Методика определения никотинамидадениндинуклеотидфосфат-изоцитратдегидрогеназы
- •1.2.5.4. Методика определения глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы
- •1.2.6. Определение концентрации восстановленного глутатиона
- •1.2.7. Методика определения аконитатгидратазы
- •1.2.8. Определение содержания диеновых конъюгатов
- •1.2.9. Определение активности каталазы
- •Ход определения активности каталазы
- •1.2.10. Методика определения концентрации цитрата
- •1.2.11. Методика определения содержания цитратсинтазы
- •1.2.12. Методика определения активности супероксиддисмутазы
- •1.2.13. Определение содержания белка по методу Лоури
- •1.2.14. Унифицированный метод определения содержания общего белка по биуретовой реакции
- •1.2.15. Определение содержания ά-токоферола
- •1.2.16. Статистическая обработка экспериментальных данных
- •2. Полученные результаты и их обсуждение
1.2.16. Статистическая обработка экспериментальных данных
Для определения достоверности результатов исследований применяли метод вариационной статистики. Полученные данные обрабатывали с использованием статистических критериев. В таблицах и на рисунках приводятся средние арифметические значения активностей данного фермента и их стандартные ошибки. Обсуждаются статистически достоверные различия при Р0,05.
2. Полученные результаты и их обсуждение
Согласно полученным результатам, при индуцировании экспериментального ревматоидного артрита в сыворотке и сердце крыс наблюдалось увеличение параметров БХЛ относительно контрольных значений.
Установлено, что светосумма БХЛ (S) увеличивалась в сыворотке крови крыс в 1,1 раза, в 1,2 раза, в 1,4 раза, в 2,9 раза, в 1,1 раза, в 2,7 раза; в сердце крыс в 1,2 раза, в 1,4 раза, в 1,6 раза, в 1,5 раза, в 1,2 раза, в 1,1 раза относительно нормы на 3-е, 5-е, 6-е, 13-е, 15-е, 17-е сутки эксперимента соответственно.
У животных с экспериментальным ревматоидном артритом наблюдалось увеличение значения интенсивности максимальной вспышки хемилюминесценции (Imax) в сыворотке крови крыс в 1,7 раза, в 1,1 раза, в 1,3 раза, в 2,9 раза, в 2 раза, в 3,3 раза; в сердце крыс в 3,3 раза, в 2 раза, в 4,7 раза, в 1,4 раза, в 2,3 раза, в 3,1 раза относительно нормы на 3-е, 5-е, 6-е, 13-е, 15-е, 17-е сутки эксперимента соответственно.
В ходе эксперимента также было зарегистрировано увеличение tgα угла наклона в сыворотке крови крыс в 1,9 раза, в 1,1 раза, в 1,5 раза, в 2,3 раза, в 1,2 раза, в 7,6 раза; в сердце крыс в 1,8 раза, в 2,6 раза, в 12,1 раза, в 5,2 раза, в 4,4 раза, в 8,4 раза относительно нормы на 3-е, 5-е, 6-е, 13-е, 15-е, 17-е сутки эксперимента соответственно.
Очевидно, значительное увеличение S и Imax как в сердце, так и в сыворотке крови экспериментальных животных в ходе развития патологии свидетельствует о возрастании интенсивности свободнорадикального окисления в данных условиях эксперимента.
Следует отметить, что наряду с интенсификацией процессов свободнорадикального окисления имела место и мобилизация антиоксидантной системы организма животного, направленная на снижение уровня протекания реакций с участием свободных радикалов, о чем свидетельствует возрастание tgα угла наклона кинетической прямой.
Содержание восстановленного глутатиона в сыворотке крови крыс увеличивалось в 1,1 раза, в 1,1 раза, 1,5 раза, в 1,1 раза, в 1,9 раза, в 1,1 раза; в сердце крыс в 1,9 раза, в 1,1 раза, в 3,1 раза, в 1,8 раза, в 1,8 раза, в 1,9 раза относительно нормы на 3-е, 5-е, 6-е, 13-е, 15-е, 17-е сутки эксперимента соответственно.
Наблюдаемое увеличение содержания восстановленного глутатиона можно объяснить запуском и работой антиоксидантной системы организма экспериментальных животных при данной патологии.
Примечание: объектом исследования служили самцы белых крыс (Ratus ratus L.) массой 150-200 г. В ходе эксперимента животные были разделены на 7 экспериментальные групп: в 1-й группе (контроль, n=2) животных содержали в стандартном режиме вивария; во 2-й, 3-й, 4-й, 5-й, 6-й, 7-й группах (n=2) животным для индуцирования экспериментального ревматоидного артрита вводили 100 мкл полного адъюванта Фрейнда в подушечку лапки животного один раз в день. Образцы для анализа забирали на 3-е, 5-е, 6-е, 13-е, 15-е, 17-е сутки соответственно каждой группе после начала эксперимента.
ВЫВОДЫ
1. При экспериментальном ревматоидном артрите светосумма БХЛ (S) увеличивалась в сыворотке крови крыс в 1,1 раза, в 1,2 раза, в 1,4 раза, в 2,9 раза, в 1,1 раза, в 2,7 раза; в сердце крыс в 1,2 раза, в 1,4 раза, в 1,6 раза, в 1,5 раза, в 1,2 раза, в 1,1 раза относительно нормы на 3-е, 5-е, 6-е, 13-е, 15-е, 17-е сутки эксперимента соответственно. Наблюдалось увеличение значения интенсивности максимальной вспышки хемилюминесценции (Imax) в сыворотке крови крыс в 1,7 раза, в 1,1 раза, в 1,3 раза, в 2,9 раза, в 2 раза, в 3,3 раза; в сердце крыс в 3,3 раза, в 2 раза, в 4,7 раза, в 1,4 раза, в 2,3 раза, в 3,1 раза относительно нормы на 3-е, 5-е, 6-е, 13-е, 15-е, 17-е сутки эксперимента соответственно. В ходе эксперимента также было зарегистрировано увеличение tgα угла наклона в сыворотке крови крыс в 1,9 раза, в 1,1 раза, в 1,5 раза, в 2,3 раза, в 1,2 раза, в 7,6 раза; в сердце крыс в 1,8 раза, в 2,6 раза, в 12,1 раза, в 5,2 раза, в 4,4 раза, в 8,4 раза относительно нормы на 3-е, 5-е, 6-е, 13-е, 15-е, 17-е сутки эксперимента соответственно.
2. Содержание восстановленного глутатиона в сыворотке крови крыс увеличивалось в 1,1 раза, в 1,1 раза, 1,5 раза, в 1,1 раза, в 1,9 раза, в 1,1 раза; в сердце крыс в 1,9 раза, в 1,1 раза, в 3,1 раза, в 1,8 раза, в 1,8 раза, в 1,9 раза относительно нормы на 3-е, 5-е, 6-е, 13-е, 15-е, 17-е сутки эксперимента соответственно.
ПРИЛОЖЕНИЕ
Рис. 1. Интенсивность максимальной вспышки биохемилюминесценции в сердце крыс в норме и при развитии патологии на 3-й, 5-й, 6-й, 13-й, 15-й, 17-й день исследования
Рис. 2. Светосумма медленной вспышки биохемилюминесценции в сердце крыс в норме и при развитии патологии на 3-й, 5-й, 6-й, 13-й, 15-й, 17-й день исследования
Рис. 3. Тангенс угла наклона кинетической прямой биохемилюминесценции в сердце крыс в норме и при патологии на 3-й, 5-й, 6-й, 13-й, 15-й, 17-й день исследования
Рис. 4. Интенсивность максимальной вспышки биохемилюминесценции в сыворотке крови крыс в норме и при развитии патологии на 3-й, 5-й, 6-й, 13-й, 15-й, 17-й день исследования
Рис. 5. Светосумма медленной вспышки биохемилюминесценции в сыворотке крови крыс в норме и при развитии патологии на 3-й, 5-й, 6-й, 13-й, 15-й, 17-й день исследования
Рис. 6. Тангенс угла наклона кинетической прямой биохемилюминесценции в сыворотке крови крыс в норме и при патологии на 3-й, 5-й, 6-й, 13-й, 15-й, 17-й день исследования
Рис. 7. Содержание восстановленного глутатиона в сердце крыс в норме и при патологии на 3-й, 5-й, 6-й, 13-й, 15-й, 17-й день исследования
Рис. 8. Содержание восстановленного глутатиона в сыворотке крови крыс в норме и при патологии на 3-й, 5-й, 6-й, 13-й, 15-й, 17-й день исследования