45.Дельта-гепатит (гепатит d)

В 1977 г. М- Ризетто с сотрудниками обнаружили еще один инфекционный агент, названный ими дельта-антигеном, способный вызывать развитие тяжелой формы гепатита. Дельта-вирус (HDV) имеет сферическую форму, его диаметр 35-37 нм. Суперкапсид дельта-вируса состоит из поверхностного антигена вируса гепатита В (HBsAg). Его геном представлен кольцевой одноцепочечной РНК. Это единственный известный вирус, у которого геном представлен кольцевидной РНК. В составе HDV имеется два белка, обладающих антигенной специфичностью: поверхностный - HBsAg, кодируемый геномом HBV, и внутренний белок HDAg, который обладает способностью взаимодействовать с РНК; это обстоятельство определяет его роль в формировании нуклеокапсида. По структуре генома (кольцевидная молекула РНК) вирус дельта-гепатита напоминает вироиды. В настоящее время классификации не поддается.

Предполагается, что дельта-вирус является дефектным вирусом, сателлитом вируса гепатита В, и для его размножения требуется обязательно наличие вируса гепатита В. Его передача происходит парентерально (с кровью или ее препаратами) и от матери к плоду. Заболеваемость гепатитом D коррелирует с заболеваемостью гепатитом В.

Лабораторная диагностика.

Материал для исследования: кровь инфицированных вирусом гепатита В, носителей

HBsAg.

1. Определение антигена HDV. Антиген вируса определяется в сыворотке крови после обработки детергентами, разрушающими HBsAg на поверхности HDV. Анитиген HDV появляется в крови за 2-9 недель до начала заболевания, обнаруживается при ОГВ и персистирует при ХГД. Вирусный антиген не всегда обнаруживается в крови, поэтому отрицательный результат на этот маркер не позволяет исключить HDV.

2. Определение антител к HDV - а-HDV (М) и а-HDV (G)Основным методом диагностики дельта-гепатита является определение антител к нему с помощью ИФА в модификации «захват» антител - иммуноглобулинов класса М. А-HDV (М) выявляются в течение нескольких недель при ОГД, затем они исчезают. Персистенция а-HDV (М) характерна для ХГД.

А-HDV (G) сохраняются в течение длительного времени при HDV. Этот маркер определяют у носителей HBsAg при проведении сероэпидемиологических исследований с целью выявления уровня распространения HDV.

3. Определение РНК HDV в ПЦР: положительный результат исследования крови указывает на наличие инфекции.

Зависимость развития дельта-инфекции от репликации вирус гепатита В дает основание полагать, что вакцинация против гепатита В явится вместе с тем и средством профилактики дельта-гепатита.

46.Вирусный гепатит с

Возбудитель - вирус гепатита С (HCV) - отнесен к семейству Flaviviridae, род Hepacаvirus. Вирион мелкий (30—38 нм в диаметре), РНК-содержащий, имеет суперкапсид, чувствителен к хлороформу. Вирус гепатита С отличается высокой склонностью к мутациям.

«Зрелые» HCV-белки —три структурных (они включаются в состав вириона) и четыре неструктурных (не входят в состав вириона, участвуя на этапе внутриклеточной репликации вируса).

Геном представлен одноцепочечной плюс-РНК. На 5'-конце РНК расположен терминальный участок, который имеет почти одинаковую последовательность нуклеотидов у всех штаммов вируса (более 90% гомологии). Этот фрагмент высоко консервативен, что делает его универсальной мишенью для выявления HCV-PHK в полимеразной цепной реакции.

Относительным постоянством нуклеотидного состава отличаются С- и КБ3-участки генома. Это определяет использование кодируемых ими антигенов при изготовлении диагностических тест-систем для иммуноферментного анализа.

Эпидемиология и клиника. Источником инфекции является только человек. Распространение вируса происходит трансфузионно при переливании крови и ее препаратов или инструментальным путем в результате занесения зараженной вирусом крови в организм здоровых людей, а также от матери плоду. Восприимчивость населения к HCV очень высокая. Вирус выделяется от больных в течение одной или нескольких недель до появления признаков болезни и до 10 нед. после начала болезни. Инкубационный период по сравнению с гепатитом В короче примерно на один месяц и составляет в среднем 6-8 нед. Клиническая картина сходна с таковой при гепатите В, однако заболевание протекает легче и характеризуется относительно быстрым выздоровлением, нередко оно протекает без желтухи; последняя наблюдается примерно у 25% больных.

Несмотря на относительно благоприятное течение, около 50% всех форм инфекции приводят к формированию хронического гепатита, а около 20% хронических поражений печени заканчивается циррозом и раком. Наряду с вирусом гепатита В, вирус гепатита С является одной из главных причин рака печени.

Лабораторная диагностика.

Материал для исследования: кровь, биоптаты печени.

HCV-инфекция сопровождается длительной вирусемией но вирус гепатита С может быть обнаружен в крови только по РНК, так как уровень вирионных частиц и вирусных антигенов ниже порога чувствительности современных иммунохимических реакций. Поэтому главным диагностическим критерием являются антитела, содержание которых в крови достаточно хорошо коррелирует с персистенцией вируса в гепатоцитах и вирусемией. «Золотым стандартом» служит обнаружение вирусспецифических РНК - последовательностей, амплифицированных после обратной транскрипции при помощи ПЦР.

Антитела(АНТИ-HCV)

Диагностические тесты прошли трехэтапную эволюцию. В системах двух первых поколений антигенами служили рекомбинантные HCV-пептиды; в тестах 3-го поколения часть из них заменена на синтетические пептиды и их эпитопные фрагменты.

Скрининговые тесты. Системы ИФА-3, сконструированные на основе сердцевинного (С22) и неструктурных (NS3-NS5) пептидов, отличаются повышенной чувствительностью, специфичностью и выявляют антитела на более ранних этапах инфекции. Скринирование донорской крови при помощи ИФА-3 практически исключает передачу вируса гепатита С реципиентам.

Подтверждающие тесты. Для подтверждения наличия антител к вирусу гепатита С в образцах сыворотки с первично положительным результатом ИФА проводится постановка иммуноблоттинга с использованием рекомбинантных антигенов или синтетических пептидов. Результат считается положительным при выявлении антител к двум и более антигенам. Антитела к вирусу гепатита С впервые могут быть обнаружены через 10-14 дней после начала заболевания. В первую очередь определяются антитела класса М к структурному белку С . HCV-PHK

Поскольку геном ВГС представлен одноцепочечной РНК, то на начальном этапе анализа с помощью реакции обратной транскрипции (ОТ) получают комплементарную ДНК (кДНК), которая в дальнейшем служит матрицей в ПЦР. Вирусная РНК определяется в сыворотке крови больных гепатитом С через 1-2 недели после заражения. Наличие в крови вирусной РНК служит маркером репликации вируса.