УО "МИНСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ КОЛЛЕДЖ"

Методическая разработка практического занятия для учащихся отделения «Медико-диагностическое дело» по дисциплине «Микробиология с микробиологическими исследованиями»

Тема занятия: «Бактериологический (культуральный) метод,

I и II этапы исследования»

Составила преподаватель Якимова Л.М.

Минск

Тема занятия: «Бактериологический (культуральный) метод,

I и II этапы исследования»

Цели занятия: познакомиться с правилами забора и транспортировки в баклабораторию исследуемого материала; освоить навыки по оформлению направления на исследование; научиться забирать слизистое отделяемое из зева с помощью ватного тампона и производить посев его на питательные среды, освоить методику II этапа бактериологического (культурального) метода исследования.

Самостоятельная работа:

1. знакомство с правилами забора и транспортировки в баклабораторию исследуемого материала

2. освоение навыков по оформлению направления на исследование

3. освоение техники забора слизистого отделяемого из зева с помощью ватного тампона.

4. посев слизистого отделяемого из зева на ЖСА

5. изучение и описание характера роста микроорганизмов на плотной питательной среде

6. приготовление мазка из части подозрительной колонии, окраска его по Граму, микроскопия

7. пересев оставшейся части подозрительной колонии на скошенный МПА для накопления чистой культуры

8. дезинфекция рабочего места и рук

Методические указания

Бактериологический (культуральный) метод - совокупность способов выделения чистой культуры микроорганизмов и ее идентификация с помощью питательных сред.

Материалом для бактериологического исследования являются: кровь, слизистое отделяемое верхних дыхательных путей, мокрота, рвотные массы, испражнения, моча, отделяемое из влагалища и шейки матки, гной из абсцессов и гнойных ран, материал, взятый от трупа, СМЖ и др.

Материал для бактериологического исследования определяется клиническим проявлением заболевания. Это может быть раневое отделяемое, гной, мокрота, содержимое абсцесса, спинномозговая жидкость, кровь, рвотные массы, промывные воды желудка, остатки пищи. Правильность взятия материала для бактериологического исследования обеспечивает эффективность работы баклаборатории. Забор материала осуществляют до начала антибиотикотерапии, исключая контакт с дезинфицирующими средствами и контаминацию микроорганизмами из смежных частей тела, слизистых и окружающей среды.

Правила забора материала при заболеваниях, вызванных патогенными кокками:

1. Кровь на стерильность: кожу над пунктируемой веной обрабатывают 70% спиртом, затем 5% настойкой йода, затем снова 70% спиртом. Взятие крови проводят стерильным шприцем в упаковке (нельзя пользоваться шприцем со стерильных лотков и нельзя проверять проходимость иглы воздухом) в количестве 10 мл у взрослых и 5 мл у детей. Кровь у постели больного над пламенем спиртовки засевают на питательную среду в соотношении 1:10 (стерильный флакон, содержащий 100 мл сахарного бульона или на двухфазную питательную среду, содержащую сахарный бульон и мясопептонный агар) по методу Кастанеда. Содержимое флакона перемешивают и немедленно доставляют в баклабораторию.

2. Мазок из зева на микрофлору: больного усаживают на стул против света и предлагают широко раскрыть рот. Корень языка придавливают шпателем, который вводят в рот обследуемого левой рукой, так чтобы введенный конец был несколько ниже того, за который его держат. Язык стараются придавить книзу и придвинуть кпереди, чтобы лучше осмотреть зев. Тампон в полость рта вводят правой рукой и снимают налет и слизь с миндалин, дужек мягкого неба и задней стенки глотки, не касаясь языка и слизистой оболочки внутренней поверхности щек. Тампон поместить в пробирку и доставить в баклабораторию.

3. Мазок из носа на патогенный стафилококк: забор материала производят стерильным ватным тампоном из глубины носовых ходов одним тампоном из обеих половин носа. Тампон помещают в пробирку и доставляют в баклабораторию.

4. Мокрота на микрофлору: утреннюю мокроту, выделившуюся при кашле, собирают в стерильную посуду. Перед откашливанием больной чистит зубы и прополаскивает рот кипяченой водой. Больному следует объяснить, чтобы он собирал мокроту, а не слюну. Материал доставляют в баклабораторию в течение часа от момента забора материала.

5. Рвотные массы и промывные воды желудка: в количестве 50-100 мл собирают в стерильную широкогорлую банку, отверстие её закрывают вощёной бумагой, обвязывают ниткой и доставляют в баклабораторию.

6. Экссудаты и транссудаты (плевральная, асцитическая жидкости и др. выпоты) материал забирают путём пункции соответствующих полостей в стерильную посуду с антикоагулянтом и немедленно доставляют в баклабораторию.

7. Моча на бактериурию: после тщательного туалета наружных половых органов собирают среднюю порцию утренней мочи в количестве 50 мл в стерильную посуду и доставляют в баклабораторию в течение часа от момента забора материала.

8. Отделяемое ран на микрофлору: взятие материала производит врач с соблюдением правил асептики и антисептики. Кожу вокруг раны обрабатывают 70% спиртом, некротические массы, гной, детрит удаляют стерильной салфеткой. Материал забирают стерильным тампоном и помещают в стерильную пробирку. Доставляют в баклабораторию в течение 1 часа от момента забора материала.

9. Спинномозговая жидкость на менингококк: взятие спинномозговой жидкости производит врач. Свежевзятый ликвор из шприца без иглы над пламенем спиртовки помещают в стерильную пробирку. Материал немедленно доставляют в баклабораторию в специальном контейнере, избегая охлаждения (в термосе или на грелке с температурой 37 С)

10. Слизь из носоглотки на менингококк: забор материала производят с задней стенки носоглотки натощак или через 2-4 часа после еды стерильным ватным тампоном, укрепленным на легко гнущейся алюминиевой проволоке. Перед употреблением конец проволоки на 2-3 см от края сгибают о край пробирки под тупым углом (135⁰), в широко раскрытый рот больного вводят сначала шпатель, прижимая язык книзу, а затем тампон. Тампон вводят концом кверху за мягкое небо в носоглотку и проводят 2-3 раза по задней стенке. При извлечении тампон не должен касаться зубов, слизистых щек, языка. Материал может быть засеян на месте его взятия на питательную среду в чашке Петри или погружен в пробирку с транспортной средой или средой обогащения, или взят увлажненным тампоном. Материал доставляют в баклабораторию немедленно, в специальном контейнере, избегая охлаждения.

11. Отделяемое половых органов на гонококк: материал получают из уретры до мочеиспускания (у мужчин), из влагалища и канала шейки матки у женщин. Головку полового члена очищают стерильным ватным тампоном, смоченным в физ. растворе, затем просушивают стерильным ватным тампоном. Материал берут петлей или ложкой Фолькмана и сразу засевают в пробирку с питательной средой для культивирования гонококка. Доставляют в баклабораторию немедленно, избегая охлаждения (либо помещают в эксикатор с горящей свечей и в термостат – при заборе материала в женской консультации).

Патологический материал, направляемый в лабораторию для бактериологического исследования, должен иметь направление, содержащее следующие сведения:

1. фамилия, имя, отчество и возраст больного

2. день заболевания. Температура тела

3. предполагаемый на основании клинических данных диагноз или повод для исследования (по эпидпоказаниям, предполагаемое бактерионосительство)

4. наименование объекта, направляемого на бакисследование (кал, кровь, мокрота). При консервировании материала указать, какой консервант употреблен, время забора материала

5. цель исследования

6. наименование учреждения и фамилия врача, направляющего материал на исследование

Бактериологический метод предусматривает 1) выделение из исследуемого материала чистой культуры микроорганизмов, 2) накопление ее, 3) изучение свойств выделенной культуры с целью последующей идентификации. Обязательным этапом всякого бактериологического исследования является выделение чистой культуры микроорганизмов. Чистая культура – это популяция микроорганизмов одного вида, получаемая из изолированной микробной колонии. Под микробной колонией подразумевается потомство бактерий, возникающее в результате размножения одной микробной клетки. Чистая культура необходима для изучения морфологических, культуральных, биохимических и антигенных свойств, по совокупности которых определяется видовая принадлежность исследуемого микроорганизма. Бактериологический метод исследования проводится в 3 этапа.

Цель I этапа: выделение чистой культуры. Для выделения чистых культур предложено много различных методов. Наиболее распространенным является метод механического разъединения микроорганизмов, чистую культуру которых предполагает выделить. В основе этого метода лежит посев биологического материала на пластинчатые питательные среды таким образом, чтобы все клетки из исследуемого материала располагались по отдельности. Кроме того, для выделения чистых культур используется индивидуальная устойчивость микроорганизмов к тому или иному фактору внешней среды. Так производится выделение споровых форм микроорганизмов, устойчивых к действию высокой температуры, микобактерий туберкулеза, безразличных к действию концентрированных растворов минеральных кислот.

При выделении чистой культуры патогенных микробов из патологического материала, загрязненного посторонней микрофлорой, иногда прибегают к заражению лабораторных животных, восприимчивых к тому виду микроорганизмов, который предполагается выделить из исследуемого материала. Так, биологический метод выделения чистой культуры применяется при исследования мокроты на содержание пневмококков.