Технология получения специфических иммуноглобулинов

1 стадия. Многократная иммунизация добровольцев соответствующим антигеном. Например, в случае получения противогриппозного иммуноглобулина живой гриппозной вакциной, в случае антистафилококкового – стафилококковым анатоксином и т.д.

2 стадия. Проведение плазмофереза.

3 стадия. Накопленную плазму объемом не менее 100 литров подвергают фракционированию в несколько этапов 50 % этанолом для осаждения фибриногена, альфа- и бета-иммуноглобулинов. Затем 25% этанолом осаждают гаммаглобулин.

4 стадия. Лиофилизация гамма-глобулина.

5 стадия. Приготовление 10 % раствора, стерилизующая фильтрация и ампулирование.

6 стадия. Контроль на стерильность, апирогенность, гомогенность, содержание белка, безвредность.

Технология получения гетерологичных специфических иммуноглобулинов

(против сибирской язвы, лептоспироза, бешенства, клещевого энцефалита, столбняка, газовой гангрены, дифтерии и др.)

Для получения таких препаратов используют кровь гипериммунизированных животных. Гипериммунизация заключается во введении нарастающих доз антигена, обеспечивающих накопление специфических антител.

При получении антирабической (против бешенства) вакцины кровь получают от лошадей, имунизировнных инактивированной вакциной и 10 % инфицированной взвесью, приготовленной из мозга кролика или овцы, зараженных вирусом бешенства. Через 4-7 дней после последней иммунизации у животных берут кровь, центрифугированием отделяют плазму. Этанолом фракционируют специфические иммуноглобулины. Далее поступают так же, как было описано в предыдущих технологиях.

Применение поликлональных антител

1. Создание искусственного пассивного иммунитета при различных инфекционных заболеваниях, как с целью лечения, так и экстренной профилактики при непосредственной угрозе заболевания.

2. Профилактика инфекционных заболеваний и лечения детей, у которых количество гамма-глобулинов в крови ниже нормы или они отсутствуют (гипо и агаммаглобулинемия).

3. Повышение резистентности организма в период выздоровления после перенесенного инфекционного заболевания.

4. В качестве диагностических препаратов для определения антигенов возбудителя инфекции.

Моноклональные антитела

Поликлональные антитела представляют собой гетерогенную популяцию иммуноглобулинов, образующихся многими клонами антителобразующих клеток. Даже если рассматривать специфические антитела, то все рано они гетерогенны по своей природе, так как синтезируются не одним клоном клеток. Разнообразие поликлональных антител невоспроизводимо, что очень осложняет процесс их стандартизации.

Абсолютной воспроизводимостью, стандартностью и наивысшей специфичностью обладают моноклональные антитела, которые секретируются одним клоном антителобразующих клеток.

Они идентичны по:

• антигенной специфичности;

• по классу и типу тяжелых и легких цепей в молекуле.

Разделить клоны антителообразующих клеток, которые образуются в организме невозможно. Поэтому моноклональные антитела получают с использованием гибридомной технологии in vitro. Это метод клеточной инженерии, основанный на объединении вне живого организма клеток животного происхождения с различными свойствами. В результате чего получают продуцент моноклональных антител - гибридную клетку (гибридому) – продукт слияния В-лимфоцита, секретирующего антитела на определенный антиген, и непрерывно растущей клетки миеломы.