ЛЕКЦИЯ: ПОЛИКЛОНАЛЬНЫЕ И МОНОКЛОНАЛЬНЫЕ АНТИТЕЛА

ПЛАН

1. Поликлональные антитела. Характеристика

2. Технология получения поликлональных антител.

3. Применение поликлональных антител

4. Моноклональные антитела. Характеристика.

5. Технология получения моноклональных антител.

6. Применение моноклональных антител

Поликлональные антитела

Иммунитет – способ защиты постоянства внутренней среды организма от генетически чужеродных агентов.

Различают иммунитет:

• активный

• пассивный.

Активный иммунитет формируется искусственно после вакцинации или возникает после перенесенной инфекции.

Пассивный иммунитет возникает в случае получения организмом от другого организма готовых антител. Такие антитела носят название поликлональных.

Поликлональные антитела - иммунологически активная фракция гликопротеинов крови, относящаяся к гамма-глобулинам. В соответствии с Международной классификацией, совокупность гамма-глобулинов крови получила название иммуноглобулинов (Ig). Существует 5 разновидностей молекул иммуноглобулинов с м.м. от 150 000 до 900 000: IgM, IgG, IgA, IgE, IgD.

Каждый из перечисленных классов антител различается по физико-химическим и функциональным свойства и имеет в структуре тяжелые и легки цепи. Основную массу Ig крови составляют IgG (70-80%).

За синтез иммуноглобулинов ответственны В-лимфоциты, которые при взаимодействии с антигенными детерминантами (инфекцией) и при участии макрофагов и Т-лимфоцитов трансформируются в плазматические клетки, синтезирующие антитела определенной специфичности (на данный антиген).

Сырьем для получения поликлональных антител (иммуноглобулинов) является донорская кровь, полученная от людей (иммуноглобулин человеческий) обычных доноров или специально иммунизированных, а также кровь животных, прошедших специальную иммунизацию (иммуноглобулины гетерологичные). Основное требование к крови – отсутствие антител к ВИЧ, вирусу гепатита С и поверхностного антигена вируса гепатита В.

Различают иммуноглобулины:

• нормальные (поливалентные);

• специфические.

Каждая серия препарата нормальных иммуноглобулинов изготавливается из смеси плазмы, полученной от большого количества доноров (не менее 1000 человек), что нивелирует различие в содержании антител и обеспечивает стандартность по иммунологической активности. В препарате содержится широкий набор антител к возбудителям тех заболеваний, которые они перенесли ранее или против которых они были вакцинированы (корь, коклюш, грипп, полиомиелит, гепатит А и другие).

Технология получения нормальных иммуноглобулинов человека

1 стадия. Заготовка крови доноров и получение плазмы путем отделения клеток крови (лейкоцитов и эритроцитов). Для чего используют плазмоферез: кровь донора собирают в специальные стерильные полимерные емкости с раствором антикоагулянта, центрифугируют. Осажденные клетки возвращают донору, а из полученной плазмы выделяют иммуноглобулины.

2 стадия. Фракционирование 8-26% этанолом при температуре ниже 0⁰С. В этих условиях денатурирующее действие этанола на белки крови незначительно и выделяемая гамма-глобулиновая фракция сохраняет растворимость.

3 стадия. Лиофилизация гамма-глобулина.

4 стадия. Приготовление 10 % раствора, стерилизующая фильтрация и ампулирование.

5 стадия. Контроль на стерильность, апирогенность, содержание белка, безвредность.

Полученные таким образом иммуноглобулины предназначены для внутримышечного или подкожного введения.

В случае получения иммуноглобулинов человеческих для внутривенного введения используют ферментативный гидролиз с химической модификацией, более мягкие осадители по сравнению со спиртом. Очищают ионообменной хроматографией. Такой препарат предназначен только для лечения стафилококковых инфекций, дифтерии и ботулизма.

Сырьем для получения специфических иммуноглобулинов направленного действия является сыворотка (плазма) доноров специально привитых или отобранных по результатам определения в них высокого титра антител против определенного антигена. Донорами могут быть как люди так и животные.