Определение серологического типа выделенного микро­ба.

Серологическая идентификация микроба посредством агглю­тинации соответствующей специфической сывороткой является завершающим этапом в проведении идентификации микробных культур (серологическое типирование).

Ориентировочная (пластинчатая) реакция агглютина­ция. Пластинчатой реакцией агглютинации на предметном стек­ле часто пользуются для определения вида микроба. На поверх­ность обезжиренного предметного стекла наносят с помощью пастеровской пипетки 2 капли агглютинирующей сыворотки и 1 каплю изотонического раствора хлорида натрия. Капли распола­гают на некотором расстоянии друг от друга, чтобы исключить возможность их слияния. Затем в каплю изотонического раствора хлорида натрия (КА) и в одну из капель агглютинирующей сыворотки вносят исследуемую бактериальную культуру, снятую с поверхности плотной питательной среды. Ко второй капле (КС) культуру не добавля­ют. Внесенную культуру тщательно перемешивают, чтобы капля жидкости сделалась равномерно мутной. Реакция протекает при комнатной температуре. Результат учитывают с помощью лупы через 5—10 мин. При положительной реакции в капле с сыворот­кой отмечается склеивание бактерий в виде зернышек или хлопь­ев, хорошо видимых при покачивании стекла.

Реакция агглютинации для определения групп крови и резус-фактора. Антитела к резус-фактору эритро­цитов являются неполными, поэтому, связываясь с эритроци­тами, эти антитела не могут их агглютинировать. Для их выяв­ления дополнительно в реакцию вводят антиглобулиновую сы­воротку, содержащую антитела к иммуноглобулинам человека (реакция Кумбса). Антитела антиглобулиновой сыворотки, вза­имодействуя с неполными антителами к резус-фактору, адсорби­рованными на эритроцитах, агглютинируют эритроциты. С помо­щью реакции Кумбса выявляют как антитела против резус-фак­тора, так и резус-фактор; диагностируют гемолитическую болезнь новорожденных, эритроциты которых соединяются с циркулиру­ющими в крови неполными антителами к резус-фактору.

Реакция непрямой (пассивной) гемагглютинации (рнга)

Для постановки РНГА требуются:

1. Сыворотка, подлежащая исследованию.

2. Растворимый антиген для сенсибилизации эритроцитов.

3. Эритроциты.

4. Изотонический раствор хлорида натрия.

Реакцию непрямой гемагглютинации ставят в пластинках из органического стекла с лунками.

Постановка реакции. Из исследуемой сыворотки гото­вят ряд последовательных разведений. Приготовленные разведе­ния сыворотки разливают в лунки по 0,5 мл. К каждому разве­дению исследуемой сыворотки прибавляют от 0,1 до 0,5 мл 0,5-1% взвеси; сенсибилизированных эритроцитов. Каждый опыт со­провождается постановкой контролен на отсутствие спонтанной агглютинации (1 и 2) и контролем на специфичность реакции (3 и 4):

1. 0,5мл изотонического раствора хлорида натрия + рабочая до­за сенсибилизированных эритроцитов.

2. 0,5мл изотонического раствора хлорида натрия + рабочая доза несенсибилизированных эритроцитов.

3. Иммунная сыворотка, взятая в разведении, соответствую­щем ее титру (последнее разведение, дающее положитель­ную реакцию в РНГА), Нерабочая доза сенсибилизирован­ных эритроцитов.

4. Нормальная сыворотка, не содержащая специфических ан­тител, + рабочая доза сенсибилизированных эритроцитов

Сущность непрямой, или пассивной, реакции гемагглютинации (РНГА) заключается в том, что эритроциты, обладая способ­ностью адсорбировать на себе антигены, становятся «чувстви­тельными» (сенсибилизированными) к соответствующей иммун­ной сыворотке. Под воздействием специфических антител сенси­билизированные эритроциты склеиваются и выпадают в осадок, образуя на дне пробирки гемагглютинат. Отличаясь высокой чувствительностью и специфичностью, РНГА позволяет обнаруживать минимальные количества анти­тел и неполноценные антигены полисахаридной природы. Результат реакции агглютинации учитывают после осажде­ния эритроцитов в контрольных пробирках непосредственно по­сле инкубации в термостате при температуре 37 °С или после дополнительного выдерживания при комнатной температуре в течение 18-24 ч. Результаты оценивают по внешнему виду осадка эритроци­тов в лунках. В положительном случае, обозначаемом знаком +, эритроциты равномерно в виде «зонтика» покрывают почти все дно пробирки или лунки. При отрицательном результате эритроциты оседают в зависимости от дна пробирки в форме компактного комочка, «пуговки». Реакцию применяют для диагностики ин­фекционных болезней, определения гонадотропного гормона в моче при установлении беременности, выявления повышенной чувствительности больного к лекарственным препаратам и гор­монам.