2 Семестр лабораторная работа № 1

Тема: Определение общего холестерина в сыворотке крови

Цель: определить содержание холестерина в сыворотке крови фотоэлектрокалориметрическим методом

Предостережение

Все пробирки, пипетки, кюветы должны быть сухими. Рабочий реагент представляет собой смесь концентрированных кислот.

Схема постановки опыта

	Опытная проба	Калибратор	Контроль
Сыворотка, мл	0,02	-	-
Калибратор, мл	-	0,02	-
Вода, мл	-	-	0,02
Рабочий реагент, мл	2,0	2,0	2,0

Перемешать реактивы и инкубировать 20 мин при температуре 20-25 °С.

Измерить оптическую плотность опытной и калибровочной проб против контрольной пробы в кювете с толщиной поглощающего слоя 5 мм при длине волны 500 нм (зеленый светофильтр).

Расчет. Содержание холестерина в сыворотке крови рассчитывается по формуле:

С= (Е опытн.пробы : Е калибратора) х 5,17 (ммоль/л),

где

С - концентрация холестерина в исследуемом образце (ммоль/л),

Е опытной пробы - оптическая плотность исследуемого образца,

Е калибратора - оптическая плотность калибратора,

5,17 ммоль/л - содержание общего холестерина в калибраторе.

Нормальные показатели - до 5,17 ммоль/л

Пограничные показатели - 5,17 - 6,5 ммоль/л

Патологические показатели - выше 6,5 ммоль/л

Результаты анализа:

Лабораторная работа № 2

Тема: Качественные реакции на ацетон и ацетоуксусную кислоту. Определение содержания β – липопротеидов в сыворотке крови. Определение общих липидов в сыворотке крови

Работа 1 Качественные реакции на ацетон и ацетоуксусную кислоту.

Цель: определить присутствие кетоновых тел в биологических жидкостях.

Опыт 1. Нитропруссидная проба на ацетон и ацетоуксусную кислоту.

1. Проба Легаля.

Ход работы: К 10 каплям мочи добавляют 1-2 капли свежеприготовленного 5% раствора нитропруссида натрия и 3-4 капли 10% раствора едкого натра. Появляется оранжево-красное окрашивание. Добавляют 5-8 капель концентрированной уксусной кислоты. В присутствии ацетона и ацетоуксусной кислоты возникает вишнево-красное окрашивание.

Результат анализа:

2. Проба Ланге.

Ход работы: К 10 каплям мочи прибавляют 2 капли концентрированной уксусной кислоты, 1-2 капли свежеприготовленного 5% раствора нитропруссида натрия и перемешивают. Пробирку наклоняют под углом 45 градусов и осторожно по стенке наслаивают равный объем концентрированного аммиака. В присутствии ацетона и ацетоуксусной кислоты на границе образуется красно-фиолетовое или фиолетовое кольцо.

Результат анализа:

Опыт 2 Феррихлоридная проба на ацетоуксусную кислоту (проба Герхардта).

Ход работы: К 15-20 каплям мочи приливают 3-5 капель 5% раствора хлорного железа. В присутствии ацетоуксусной кислоты в количестве свыше 0,07% появляется красное окрашивание. Сходное окрашивание получается и в отсутствие ацетоуксусной кислоты в моче, после приема внутрь некоторых лекарственных веществ: салициловой кислоты, аспирина и др. При стоянии и при кипячении в течение 2 минут в присутствии указанных выше лекарственных веществ окраска не исчезает.

Результат анализа:

Выводы:

Работа 2. Определение содержания β - липопротеидов в сыворотке крови.

Принцип метода: В основу метода положена способность β-липопротеидов (ЛНП) осаждаться в присутствии хлорида кальция и гепарина; при этом изменяется мутность раствора. По степени помутнения раствора и судят о концентрации β-липопротеидов в сыворотке крови.

Порядок выполнения работы: В пробирку вносят 2 мл 0,27% раствора СаСl₂ и 0,2 мл сыворотки крови, перемешивают. Определяют оптическую плотность раствора (E₁) в кюветах на 5 мм, при красном светофильтре (670). Раствор из кюветы переливают в пробирку, добавляют микропипеткой 0,04 мл 1% р-ра гепарина, перемешивают и точно через 3 мин снова определяют оптическую плотность р-ра (E₂) в тех же условиях. Раствор сравнения - дистиллированная вода.

Е = Е₂ – Е₁

Расчёт концентрации β-липопротеидов:

X (мг%) = Е х·1000

1000 - эмпирический коэффициент, предложенный Ледвином, так как построение калибровочной кривой сопряжено с рядом трудностей.

Норма: 300- 550 мг%

Результат анализа:

Выводы:

Работа 3 Определение общих липидов в сыворотке крови

Принцип метода: Ненасыщенные липиды и жирные кислоты, фосфолипиды и холестерин взаимодействуют после гидролиза серной кислоты с фосфованилиновым реактивом с образованием красного окрашивания.

Схема постановки опыта

Содержимое пробирки	Проба	Стандарт	Контроль
Сыворотка, мл	0,02	-	-
Реактив 1, мл	-	0,02	-
Кислота серная конц, мл	1,5	1,5	1,5
Н2О, мл	−	─	0,02

Перемешивают и нагревают 15 мин на кипящей водяной бане. После охлаждения пробирок проточной водой отмеряют

Гидролизат, мл	0,1	0,1	0,1
Реактив 2, мл	1,5	1,5	1,5

Перемешивают и оставляют стоять 50 мин при +15…+25° С.

Не позднее чем через 60 мин измеряют оптическую плотность пробы /А₁/и стандарта /A₂/ против контрольного раствора. Длина волны (510-550) нм, кювета 5 мм.

Расчет , где

С - общее содержание липидов, г/л;

А₁- оптическая плотность пробы;

А₂ – оптическая плотность стандарта.

Результаты анализа:

Как физиологическое явление увеличение содержания липидов в крови (гиперлипемия) наступает через 1-4 ч после принятия пищи. Концентра­ция липидов крови увеличивается (гиперлипемия) при диабете /до 10-20 г/л, липоидном нефрозе, циррозе печени, ожирении, атеросклерозе, ишемической болезни сердца, гипотермозе, панкреатите.

Норма: 4-8 г/л.

Выводы: