- •Оглавление
- •Глава 1. Биологические функции липидов 7
- •Глава 2. Липиды плазмы крови 24
- •Глава 3. Алипопротеины 39
- •Глава 4. Модифифированные липопротеиды и клеточные механизмы развития атеросклероза 47
- •Введение
- •Глава 1 биологические функции липидов
- •1.1. Простые липиды
- •1.2. Сложные липиды: фосфолипиды (фосфоглицериды), сфингофосфолипиды, стерины и стериды
- •2. Сфингофосфолипиды
- •1.3. Жирные кислоты
- •1.4. Ресинтез триглицеридов
- •1.5. Окисление жирных кислот
- •1.6. Пероксидация жирных кислот
- •1.7. Эйкозаноиды
- •1.8. Глицерофосфолипиды
- •1.9. Холестерин
- •1.10. Количественное содержание липидов в плазме крови
- •Глава 2 липопротеины плазмы крови
- •2.1. Классификация липопротеидов
- •2.2. Хиломикроны
- •2.4. Липопротеиды низкой плотности (лпнп)
- •2.5. Общая характеристика липопротеидов высокой плотности (лпвп)
- •2.6. Патологические липопротеиды
- •Глава 3 алипопротеины
- •3.1. Алипопротеины а
- •3.2. Апопротеин а- II
- •3.3. Алипопротеин в
- •3.4. Апопротеины с
- •3.5. Апопротеин е
- •3.6. Апопротеин d
- •3.7. Алипопротеин (а)
- •Глава 4 модифицированные липопротеиды и клеточные механизмы развития атеросклероза
- •4.1. Разновидности модификаций липопротеидов
- •Липопротеиды низкой плотности, модифицированные в артериальной стенке
- •4.3. Взаимодействие нативных и модифицированных
- •Взаимодействие модифицированных липопротеидовс макрофагами артериальной стенки
- •4.5. Антиатерогенное действие липопротеидов высокой плотности
- •Глава 5 дислипопротеидемии
- •5.1. Первичные дислипопротеидемии
- •5.2. Вторичные дислипопротеидемии (дислипидемии)
- •Глава 6 практические рекомендации. Важная информация
- •Глава 7 свободно–радикальные процессы в организме человека
- •Глава 8 диагностическое значение определения
- •В патологии человека
- •Глава 9 хемилюминесцентные методы исследования интенсивности перекисного окисления липидов в сыворотке крови человека
- •9.1. Методы определения общей антиоксидантной
- •9. 2. Метод определения перекисей липидов с помощью
- •9. 3. Метод определения общего холестерина по реакции
- •9.4. Метод определения общего холестерина
- •9.5. Метод определения содержания холестерина
- •9.6. Метод определения в плазме крови триглицеридов
- •9.7. Метод фракционирования липопротеидов
- •9.8. Оценка рисков сердечно–сосудистых заболеваний с помощью диагностических реагентов Dia Sys
- •Вопросы для контроля
- •Литература
9.5. Метод определения содержания холестерина
во фракциях липопротеидов
Липопротеины очень низкой плотности (ЛПОНП) и липопротеиды низкой плотности (ЛПНП) в противоположность липопротеинам высокой плотности (ЛПВП) образуют нерастворимые комплексы с гепарином в присутствии ионов марганца. В надосадочной жидкости, оставшейся после осаждения ЛПНП и ЛПОНП, остается α - холестерин или ХС β ЛПВП.
Нормальное содержание ХС ЛПВП в сыворотке крови составляет 0,9 – 1,0 ммоль/ л.
Принцип метода: Хиломикроны, ЛПОНП и ЛПНП осаждаются добавлением фосфорновольфрамовой кислоты и хлорида магния. После центрифугирования супернатант содержит ЛПВП – фракцию, содержание холестерина в которой определяется ферментативно.
Полученные значения достоверны, если:
1. в пробе нет хиломикронов;
2. концентрация триацилглицеридов не превышает 400 мг/мл;
3. в пробах не обнаруживается следов III типа дислипопротеидемии.
Измерение при длине волны 546 нм дает завышение количества ЛПВП холестерина спектром поглощения гемоглобина, которое можно игнорировать при значениях до 200 мг гемоглобина на 100 мл.
Полученный при центрифугировании супернатант должен быть прозрачным. Если проба содержит большое количество триглицеридов (более 1000 мг / 100 мл) или часть осадка может плавать на поверхности, в этом случае надо развести образец раствором NaCI в отношении 1: 1 и повторить осаждение.
9.6. Метод определения в плазме крови триглицеридов
Триглицериды или нейтральные жиры представляют собой эфиры глицерина и трех остатков жирных кислот, чаще всего с 16 – 18 атомами углерода. Точный состав жирно кислотных остатков может колебаться в определенгых пределах и зависит от характера питания. Количество триглицеридов определяют по содержанию глицерина, который образуется при щелочном или ферментативном гидролизе.
Принцип метода: при определении триглицеридов после экстракции смесью гептана и изопропилового спирта, триглицериды экстрагируются смесью гептана и изопропилового спирта, в смесь переходят только неполярные липиды, а более полярные фосфолипиды остаются в водной фазе. Триглицериды омыляются (гидролизуются) щелочью, глицерин окисляется йодной кислотой до формальдегида, который определяется по цветной реакции с ацетилацетоном.
Реактивы:
Гептан.
Изопропиловый спирт.
Серная кислота 0,08 н (2,2 мл концентрированной Н2SO4 на 1 л воды).
Едкое кали 6,25 моль / л: 17,8 г КОH растворяют в 50 мл воды.
Уксусная кислота, 50 г / л.
Йодная кислота: растворяют 0,6 г HIO 4 . 2 Н2О (перйодная кислота) в 100 мл 5% уксусной кислоты.
Аммония ацетат 2 моль / л: растворяют 154 г ацетата аммония в воде, объем доводят до 1 л.
Ацетилацетоновый реактив: 1,5 мл ацетилацетона разводят раствором уксуснокислого аммония до суммарного объема 200 мл.
Калибровочный раствор треолеина, 2 ммоль / л. содержит 170 мг триолеина в 100 мл изопропилового спирта.
Ход определения:
К 0,5 мл сыворотки или плазмы добавляют 2 мл гептана, 3,5 мл изопропилового спирта и 1 мл 0,08 н. серной кислоты, перемешивают и через 5 мин центрифугируют. Из верхнего (гептанового) слоя отбирают 0,4 мл, добавляют 2 мл изопропилового спирта и 1 каплю 6, 25 н. КОН. Перемешивают, нагревают на водяной бане 10 мин при 70 град.С. После охлаждения добавляют 0,2 мл перйодатного реактива и 1 мл ацетил ацетонового реактива, после перемешивания вновь нагревают 10 мин при 70 градусах С. Развивается желто - зеленое окрашивание, интенсивность которого измеряют при длине волны 425 нм в кюветах с длиной оптического пути 0,5 см против холостой пробы, которую ставят так же, как и опытную, но вместо исследуемого материала берут 0,5 мл воды.
Калибровочную пробу ставят так же, как и опытную, но вместо сыворотки или плазмы берут 0,5 мл калибровочного раствора и 0,5 мл воды: развивающаяся окраска соответствует окраске опытной пробы, в которую взята плазма с содержанием триглицеридов 2 ммоль / л.
Нормальные величины триглицеридов в плазме крови считают 0,55- 1,65 ммоль / л (50 – 150 мг в 100 мл).
Наибольшее значение имеет определение триглицеридов для типирования гиперлипидемий, а также повышенное содержание триглицеридов отмечается при нефротическом синдроме, гипотиреозе.