- •Оглавление
- •Глава 1. Биологические функции липидов 7
- •Глава 2. Липиды плазмы крови 24
- •Глава 3. Алипопротеины 39
- •Глава 4. Модифифированные липопротеиды и клеточные механизмы развития атеросклероза 47
- •Введение
- •Глава 1 биологические функции липидов
- •1.1. Простые липиды
- •1.2. Сложные липиды: фосфолипиды (фосфоглицериды), сфингофосфолипиды, стерины и стериды
- •2. Сфингофосфолипиды
- •1.3. Жирные кислоты
- •1.4. Ресинтез триглицеридов
- •1.5. Окисление жирных кислот
- •1.6. Пероксидация жирных кислот
- •1.7. Эйкозаноиды
- •1.8. Глицерофосфолипиды
- •1.9. Холестерин
- •1.10. Количественное содержание липидов в плазме крови
- •Глава 2 липопротеины плазмы крови
- •2.1. Классификация липопротеидов
- •2.2. Хиломикроны
- •2.4. Липопротеиды низкой плотности (лпнп)
- •2.5. Общая характеристика липопротеидов высокой плотности (лпвп)
- •2.6. Патологические липопротеиды
- •Глава 3 алипопротеины
- •3.1. Алипопротеины а
- •3.2. Апопротеин а- II
- •3.3. Алипопротеин в
- •3.4. Апопротеины с
- •3.5. Апопротеин е
- •3.6. Апопротеин d
- •3.7. Алипопротеин (а)
- •Глава 4 модифицированные липопротеиды и клеточные механизмы развития атеросклероза
- •4.1. Разновидности модификаций липопротеидов
- •Липопротеиды низкой плотности, модифицированные в артериальной стенке
- •4.3. Взаимодействие нативных и модифицированных
- •Взаимодействие модифицированных липопротеидовс макрофагами артериальной стенки
- •4.5. Антиатерогенное действие липопротеидов высокой плотности
- •Глава 5 дислипопротеидемии
- •5.1. Первичные дислипопротеидемии
- •5.2. Вторичные дислипопротеидемии (дислипидемии)
- •Глава 6 практические рекомендации. Важная информация
- •Глава 7 свободно–радикальные процессы в организме человека
- •Глава 8 диагностическое значение определения
- •В патологии человека
- •Глава 9 хемилюминесцентные методы исследования интенсивности перекисного окисления липидов в сыворотке крови человека
- •9.1. Методы определения общей антиоксидантной
- •9. 2. Метод определения перекисей липидов с помощью
- •9. 3. Метод определения общего холестерина по реакции
- •9.4. Метод определения общего холестерина
- •9.5. Метод определения содержания холестерина
- •9.6. Метод определения в плазме крови триглицеридов
- •9.7. Метод фракционирования липопротеидов
- •9.8. Оценка рисков сердечно–сосудистых заболеваний с помощью диагностических реагентов Dia Sys
- •Вопросы для контроля
- •Литература
9.4. Метод определения общего холестерина
(метод Илька)
Принцип метода: присутствующий в плазме или сыворотке крови холестерин и его эфиры дают цветное окрашивание при обработке смесью уксусного ангидрида, серной и уксусной кислот.
В ходе реакции холестерин последовательно окисляется. При этом каждая стадия реакции сопровождается образованием молекулы ХС, которая имеет на одну двойную связь больше, чем соединение, из которого она образовалась. В результате конечного окисления иона 3,5 – холестодиена получается окрашенное соединение, которое растворенное в серной кислоте дает максимум абсорбции при 410 и 610 нм. Из - за неустойчивости окраски соединения время фотометрирования должно быть точно выдержано.
Реактивы:
Ледяная уксусная кислота.
Концентрированная серная кислота.
Уксусный ангидрид.
Абсолютный спирт.
Кислотная смесь: в сухую колбу наливают 10 мл ледяной уксусной кислоты и 50 мл уксусного ангидрида, затем при постоянном перемешивании и охлаждении добавляют 10 мл концентрированной серной кислоты.
Калибровочный раствор: 232 мг холестерина растворяют в 2-3 мл хлороформа и доводят до объема 100 мл абсолютным спиртом. Раствор содержит холестерин в концентрации 6 ммоль/ л.
Ход определения: К 2,1 мл кислотной смеси медленно по стенке пробирки добавляют 0,1 мл плазмы или сыворотки без гемолиза, перемешивают, ставят на 20 минут в термостат или водяную баню при температуре 37 град. С, затем фотометрируют в кювете с длиной оптического пути 0,5 см при длине волны 625 нм.
Построение калибровочной кривой. К 0,05 – 0, 2 мл калибровочного раствора добавляют такое же количество кислотной смеси, чтобы общий объем был 2, 2 мл, перемешивают и выдерживают 20 минут при 37 град. С, так же как опытные пробы, а затем фотометрируют. Окраска калибровочной пробы, в которую взято 0,05 мл калибровочного раствора соответствует содержанию холестерина в плазме 3 ммоль / л, пробы, в которую взято 0,1 мл соответствует содержанию 6 ммоль / л и так далее.
Реакционная смесь со стандартным раствором ХС имеет изумрудный цвет. Однако пробы сыворотки могут давать зеленый, голубой, бурый цвета. Это связано с тем, что в результате образования эндогенного тепла в реакцию вступают многие компоненты сыворотки крови. Кроме того, в реакции свободный ХС и его эфиры образуют цветные комплексы с разным коэффициентом молекулярного поглощения. В случае высокого содержания эфиров ХС оптическая плотность оказывается более высокой.
Референтные величины: холестерин 4,65 – 6, 46 ммоль/л (180 – 250 мг/дл). При концентрации холестерина в пробе выше 16 ммоль/л сыворотку разводят физиологическим раствором в соотношении 1:1.
Реакция чувствительна на изменение температуры, поэтому необходимо особенно соблюдать охлаждение реакционной смеси после добавления серной кислоты.
На результат анализа влияет билирубин в концентрации выше 50 мкмоль/л, но интерферренцию билирубина можно исправить расчетом. Содержание 17 мкмоль/л билирубина приводит к завышению содержания холестерина в сыворотке примерно на 0,1 моль/л. Сыворотка должна быть негемолизированной.