- •Оглавление
- •Глава 1. Биологические функции липидов 7
- •Глава 2. Липиды плазмы крови 24
- •Глава 3. Алипопротеины 39
- •Глава 4. Модифифированные липопротеиды и клеточные механизмы развития атеросклероза 47
- •Введение
- •Глава 1 биологические функции липидов
- •1.1. Простые липиды
- •1.2. Сложные липиды: фосфолипиды (фосфоглицериды), сфингофосфолипиды, стерины и стериды
- •2. Сфингофосфолипиды
- •1.3. Жирные кислоты
- •1.4. Ресинтез триглицеридов
- •1.5. Окисление жирных кислот
- •1.6. Пероксидация жирных кислот
- •1.7. Эйкозаноиды
- •1.8. Глицерофосфолипиды
- •1.9. Холестерин
- •1.10. Количественное содержание липидов в плазме крови
- •Глава 2 липопротеины плазмы крови
- •2.1. Классификация липопротеидов
- •2.2. Хиломикроны
- •2.4. Липопротеиды низкой плотности (лпнп)
- •2.5. Общая характеристика липопротеидов высокой плотности (лпвп)
- •2.6. Патологические липопротеиды
- •Глава 3 алипопротеины
- •3.1. Алипопротеины а
- •3.2. Апопротеин а- II
- •3.3. Алипопротеин в
- •3.4. Апопротеины с
- •3.5. Апопротеин е
- •3.6. Апопротеин d
- •3.7. Алипопротеин (а)
- •Глава 4 модифицированные липопротеиды и клеточные механизмы развития атеросклероза
- •4.1. Разновидности модификаций липопротеидов
- •Липопротеиды низкой плотности, модифицированные в артериальной стенке
- •4.3. Взаимодействие нативных и модифицированных
- •Взаимодействие модифицированных липопротеидовс макрофагами артериальной стенки
- •4.5. Антиатерогенное действие липопротеидов высокой плотности
- •Глава 5 дислипопротеидемии
- •5.1. Первичные дислипопротеидемии
- •5.2. Вторичные дислипопротеидемии (дислипидемии)
- •Глава 6 практические рекомендации. Важная информация
- •Глава 7 свободно–радикальные процессы в организме человека
- •Глава 8 диагностическое значение определения
- •В патологии человека
- •Глава 9 хемилюминесцентные методы исследования интенсивности перекисного окисления липидов в сыворотке крови человека
- •9.1. Методы определения общей антиоксидантной
- •9. 2. Метод определения перекисей липидов с помощью
- •9. 3. Метод определения общего холестерина по реакции
- •9.4. Метод определения общего холестерина
- •9.5. Метод определения содержания холестерина
- •9.6. Метод определения в плазме крови триглицеридов
- •9.7. Метод фракционирования липопротеидов
- •9.8. Оценка рисков сердечно–сосудистых заболеваний с помощью диагностических реагентов Dia Sys
- •Вопросы для контроля
- •Литература
9. 2. Метод определения перекисей липидов с помощью
тиобарбитуроной кислоты
Принцип метода: конечным продуктом перекисного окисления ненасыщенных жирных кислот в составе триглицеридов, фосфолипидов, эфиров холестерина является малоновый диальдегид, он дает цветную реакцию с тиобарбитуровой кислотой (ТБК)
Реактивы:
1. Трис – HCI буфер, рН 7,4.
2. 15% раствор трихлоруксусной кислоты.
3. 0,04% раствор этилендиаминтетроацетата (ЭДТА).
4. 0,5% раствор тиобарбитуровой кислоты (ТБК).
Ход определения: К 2 мл исследуемой пробы для предотвращения перекисного окисления добавляют 1, 9 мл 15% ТХУ и 0,1 мл 0,04 М ЭДТА. Осадок белка отделяют центрифугированием при 3000 об / мин 10 мин. К 2 мл надосадочной жидкости приливают 2 мл 0,5% ТБК и помещают на 19 мин. в кипящую водяную баню. После охлаждения пробы колориметрируют при 530 – 540 нм против контроля на реактивы. Содержание МДА рассчитывают по молекулярному коэффициенту экстинкции: 1 М МДА - 153000; 1 мкМ МДА –0,153. Зная концентрацию белков, липидов, можно рассчитать количество перекисей на грамм (или мг) белка, на грамм (или мг) липидов.
9. 3. Метод определения общего холестерина по реакции
с хлорным железом (метод Златкис–Зака)
Принцип метода: Содержащийся в плазме или сыворотке крови свободный и эфирносвязанный холестерин окисляется хлорным железом в присутствии уксусной, серной и фосфорной кислот с образованием ненасыщенных продуктов, окрашенных в красно-фиолетовый цвет. Фосфорная кислота повышает стойкость реактива, содержащего хлорное железо.
Реактивы:
1. Ледяная уксусная кислота.
2. Серная кислота концентрированная.
3. Железо хлорное FeCI 3 . 6 Н2О.
4. Ортофосфорная кислота; содержит 85% Н3 РО4.
5. Раствор хлорного железа: 2,5 г хлорного железа растворяют в 80 мл ортофосфорной кислоты, нагревая до полного растворения, затем охлаждают и доводят объем до 100 мл ортофосфорной кислотой.
6. Цветной реактив: к 8 мл раствора хлорного железа добавляют серную кислоту так, чтобы суммарный объем был 100 мл.
7. Калибровочный раствор холестерина в уксусной кислоте: 116 мг холестерина растворяют в 100 мл ледяной уксусной кислоты. Раствор содержит холестерин в концентрации 3 ммоль./л.
Ход определения: К 1,3 мл уксусной кислоты осторожно добавляют 0,05 мл плазмы или сыворотки крови без гемолиза, перемешивают, а затем добавляют 1 мл цветного реактива, хорошо перемешивают встряхиванием и оставляют на 30 мин при комнатной температуре, после чего фотометрируют при длине волны 530 нм в кювете с длиной оптического пути 1 см против холостого опыта, в который берут 1,3 мл уксусной кислоты, 0,05 мл исследуемой сыворотки или плазмы и 1 мл концентрированной серной кислоты.
Для приготовления калибровочного графика вместо исследуемого материала берут 0,05 – 0,2 мл калибровочного раствора, к которому добавляют уксусную кислоту до суммарного объема 1, 35 мл, а затем добавляют 1 мл цветного реактива. Проба, в которую взяли 0,05 мл калибровочного реактива по окраске соответствует опытной пробе с содержанием холестерина в исследуемом материале 3 ммоль/л; проба, в которую взяли 0,1 мл калибровочного раствора, соответствует содержанию холестерина 6 ммоль/л и так далее. Расчет проводят по калибровочному графику.