- •Оглавление
- •Глава 1. Биологические функции липидов 7
- •Глава 2. Липиды плазмы крови 24
- •Глава 3. Алипопротеины 39
- •Глава 4. Модифифированные липопротеиды и клеточные механизмы развития атеросклероза 47
- •Введение
- •Глава 1 биологические функции липидов
- •1.1. Простые липиды
- •1.2. Сложные липиды: фосфолипиды (фосфоглицериды), сфингофосфолипиды, стерины и стериды
- •2. Сфингофосфолипиды
- •1.3. Жирные кислоты
- •1.4. Ресинтез триглицеридов
- •1.5. Окисление жирных кислот
- •1.6. Пероксидация жирных кислот
- •1.7. Эйкозаноиды
- •1.8. Глицерофосфолипиды
- •1.9. Холестерин
- •1.10. Количественное содержание липидов в плазме крови
- •Глава 2 липопротеины плазмы крови
- •2.1. Классификация липопротеидов
- •2.2. Хиломикроны
- •2.4. Липопротеиды низкой плотности (лпнп)
- •2.5. Общая характеристика липопротеидов высокой плотности (лпвп)
- •2.6. Патологические липопротеиды
- •Глава 3 алипопротеины
- •3.1. Алипопротеины а
- •3.2. Апопротеин а- II
- •3.3. Алипопротеин в
- •3.4. Апопротеины с
- •3.5. Апопротеин е
- •3.6. Апопротеин d
- •3.7. Алипопротеин (а)
- •Глава 4 модифицированные липопротеиды и клеточные механизмы развития атеросклероза
- •4.1. Разновидности модификаций липопротеидов
- •Липопротеиды низкой плотности, модифицированные в артериальной стенке
- •4.3. Взаимодействие нативных и модифицированных
- •Взаимодействие модифицированных липопротеидовс макрофагами артериальной стенки
- •4.5. Антиатерогенное действие липопротеидов высокой плотности
- •Глава 5 дислипопротеидемии
- •5.1. Первичные дислипопротеидемии
- •5.2. Вторичные дислипопротеидемии (дислипидемии)
- •Глава 6 практические рекомендации. Важная информация
- •Глава 7 свободно–радикальные процессы в организме человека
- •Глава 8 диагностическое значение определения
- •В патологии человека
- •Глава 9 хемилюминесцентные методы исследования интенсивности перекисного окисления липидов в сыворотке крови человека
- •9.1. Методы определения общей антиоксидантной
- •9. 2. Метод определения перекисей липидов с помощью
- •9. 3. Метод определения общего холестерина по реакции
- •9.4. Метод определения общего холестерина
- •9.5. Метод определения содержания холестерина
- •9.6. Метод определения в плазме крови триглицеридов
- •9.7. Метод фракционирования липопротеидов
- •9.8. Оценка рисков сердечно–сосудистых заболеваний с помощью диагностических реагентов Dia Sys
- •Вопросы для контроля
- •Литература
Глава 9 хемилюминесцентные методы исследования интенсивности перекисного окисления липидов в сыворотке крови человека
Принцип метода. Метод индуцирования ХЛ гидроперекисью третичного бутила или перекисью водорода с сульфатом железа основан на том, что в представленной системе происходит каталитическое разложение гидроперекиси и перекиси ионами металла с переходной валентностью (2-х валентное железо). Образующиеся при этом свободные радикалы вступают в процесс инициации ПОЛ в исследуемом биологическом субстрате. Интенсивность ПОЛ определяется по значению светосуммы.
Реактивы:
1. Раствор сульфата железа (0,05 мМ): 0,14 г FeSO 4 растворяют в 50 мл дистиллированной воды.
2. Стандартного пергидроля 2 мл растворяют в 28 мл дистиллированной воды.
3. Фосфатный буфер готовится из навесок KH2 PO 4 1, 361 г и KCI 3, 015 г на 0,5 литра дистиллированной воды. До необходимого рН доводят с помощью концентрированного раствора KOH (рН = 7, 5).
Ход работы:
В измерительную кювету вносят 1 мл раствора сульфата железа, 0, 3 мл сыворотки крови, 0, 5 мл фосфатного буфера и 0,02 мл свежеприготовленного 2% раствора перекиси водорода или гидроперекиси третбутанола. Кювету с приготовленным раствором вносят на измерительную позицию хемилюминометра и измеряют световой выход за 30 секунд.
Интенсивность ХЛ меняется у больных людей в сравнении с ХЛ здоровых лиц. Повышение ХЛ выше значений нормы более, чем в 3-5 раз свидетельствует о развитии воспалительных заболеваний, атеросклеротических проявлениях, остром периоде инфекционных заболеваний. Снижение интенсивности ХЛ более, чем в 2-4 раза может свидетельствовать о развитии злокачественных новообразований.
9.1. Методы определения общей антиоксидантной
активности биологических образцов
Принцип метода: он заключается в том, что вносимые пробы сыворотки крови, плазмы или других биологических объектов в модельную систему, состоящую из липопротеидной желтковой массы, влияют, ингибируют, подавляют ее свечение. В липопротеидной желтковой модели инициируется перекисное окисление липидов с помощью Fe 2+- - металла переменной валентности, сопровождающееся хемилюминесценцией. Сигнал усиливается введением люминола. Степень подавления ХЛ свидетельствует о суммарной антиоксидантной активности вносимой пробы. То есть, данным методом проводится определение тормозящего влияния биологического субстрата на развитие свободнорадикальных процессов в модельной системе.
Определение антиоксидантной активности проводится в крови, взятой без антикоагулянта. Для анализа берется 0,3 мл сыворотки крови, разводят ее физиологическим раствором в 30 раз.
Реактивы:
1. Раствор сульфата железа (0,105 мМ): 0,28 г Fe SO4 растворяют в 50 мл дистиллированной воды.
2. Фосфатный буфер готовится из навесок: KH2PО4 1,361 г и KCI 3,915 г на 0, 5 л дистиллированной воды. До необходимого уровня рН = 11,0 доводят с помощью KOH. В буфер добавляют 0,1 мл 30% раствора гидроперекиси на 100 мл буфера.
3. Маточный раствор готовят из свежего яйца: желток вносят в мерный цилиндр, его объем должен быть 15 мл, добавить такой же обхем воды и хорощо перемещать. Хранить не более 10 дней в холодильнике.
4. Рабочий раствор готовят из маточного раствора: 1мл маточного раствора разводят 24 мл воды.
5. Раствор люминола (0,1 мМ) 2 мг люминола расворяют в 200 мл диметилсульфоксида и доводят водой до 100 мл.
6. Раствор 2% перекиси водорода готовится перед работой.
Ход работы:
Перед началом работы необходимое количество реактивов выдержать в термостате при 37 градусов С в течение 10 минут. В измерительную кювету внести 0,2 мл раствора сульфата железа, добавить 0, 8 мл фосфатного буфера и 0,2 мл люминола и 0,2 мл рабочего раствора. Все тщательно перемешать, измерить световой выход за 30 – 60 сек. Выждать и определить максимальное свечение второй вспышки ХЛ. Например, интенсивность ХЛ модельной системы 1000 имп / сек. Следующий этап – подбор такого объема разведенной пробы, который бы снижал уровень свечения ХЛ ровно на половину – до 500 ед. светосуммы. Величина обратная этому объему и будет обозначать антиоксидантную активность пробы.