3.5 Контрольные вопросы

• главная дыхательная цепь клетки и ее ферменты

• характеристика других путей клеточного дыхания

• химическая природа и биологическая роль каталазы и пероксидазы

• энергетический эффект биологического окисления.

Лабораторная работа №4. «Рефрактометрическое определение общего белка в сыворотке крови. Электрофорез белка»

Показатель общего белка в сыворотке крови имеет видовую специфичность. Его содержание зависит от многих факторов. Все это нашло широкое применение в практике животноводства и др. этот метод наиболее удобен для определения концентрации белка в сыворотке крови, лимфе, экссудатах и др. биологических жидкостях.

4.1 Цель работы. Освоить метод количественного определения белков в сыворотке крови. Разобрать вопрос о роли белков в жизнедеятельности организма.

4.2 Реактивы. Сыворотка крови, дистиллированная вода, спирт для протирания призм.

4.3 Оборудование. Штатив с пробирками, стеклянные палочки, марлевые салфетки, рефрактометр.

4.4 Ход работы. Принцип рефрактометрии заключается в определение коэффициента преломления сыворотки. Показатель преломления сыворотки крови зависит от содержания в ней белковых веществ. Перед началом работ необходимо настроить рефрактометр. Для этого на поверхность измерительной призмы нанести стеклянной палочкой каплю дистиллированной воды и осторожно закрыть верхней призмой. Вращая ручку измерительной головки, совместить границу света и тени с пресечением визирных линий в поле зрения окуляра. Если при этом наблюдается радужная окраска, ее следует устранить вращением дисперсного компенсатора. Затем отсчитать показатель преломления по шкале. Для воды он должен быть равен 1,3333. если этого не наблюдается, то поворотом ручки измерительного блока индекс шкалы установить на показателе преломления 1,3333, а перекрестие нитей навести точно на границу света и тени с помощью специального ключа. Стеклянной палочкой нанести на поверхность сухой призмы 2-3 капли сыворотки крови и быстро закрыть камеру. Совместить границу света и тени с пересечением визирной линии, произвести по шкале отсчет показания преломления сыворотки крови и по величине коэффициента преломления найти в таблице процентное содержание белка.

Полученные результаты оформить в таблицу.

Таблица 18. содержание белка в сыворотке крови.

№ пробы

Показатель преломления

Содержания белка, %

Физиологическая норма, %

4.5 Ознакомиться с устройством прибора для электрофореза, методикой разделения белков в электрическом поле, анализом электрофореграмм.

4.6 Контрольные вопросы

- Принцип рефрактометрического метода определения общего белка;

- Сущность метода электрофореза белков и его значение для клиники;

- Норма содержания белков в крови с.х. животных;

- Белки полноценные и неполноценные;

- Фракции белков в сыворотке крови, их характеристики.

Лабораторная работа №5

«Определение содержания неорганического фосфора в сыворотке крови (по С.А. Ивановскому)»

Минеральный обмен в организме с.х. животных важнейшую часть в процессах формирования продуктивных свойств. В качестве основных показателей минерального обмена используют содержание в крови макроэлементов кальций и фосфор. В условиях РБ зачастую имеет место дефицит обеспеченности животных фосфором.

5.1 Цель работы. Освоить один из методов количественного определения фосфора в сыворотке крови, разобрать вопрос о значении минерального веществ для организма с.х. животных и птицы.

5.2 Реактивы. 20% раствор трихлоруксусной кислоты (ТХУ), 1% раствор аскорбиновой кислоты на 0,1нрастворе HCI, стандартный раствор фосфора, 5% раствор молибденовокислого аммония на 15% растворе серной кислоты, дистиллированная вода, сыворотка крови.

5.3 Оборудование. Штатив с обычными и мерными пробирками, пипетки, обеззоленные фильтры, фотоэлектроколориметр.

5.4 Ход работы. В пробирку налить 3 мл. дистиллированной воды, 1 мл. исследуемой сыворотки крови, 2 мл. раствора ТХУ и отфильтровать в мерную пробирку. Набравь 2,5 мл. фильтра, добавить 1 мл. молибдата аммония, 1 мл. аскорбиновой кислоты и довести водой до 10 мл. одновременно в другой пробирке поставить контрольный опыт, для чего внести в нее 3 мл. стандартного раствора фосфора. 1 мл. молибдата аммония, 1 мл. аскорбиновой кислоты и 5 мл. дистиллированной воды. Общий объем содержимого, как и в опытной пробирке – 10 мл. Через 10 мин. опытную и контрольную пробы проколориметрировать против дистиллированной воды на ФЭКе с зеленым светофильтром в сантиметровой кювете.

Расчет произвести:

Д _х* 10

Рмг. % = ----------- , где

Д_к

Д_х – оптическая плотность пробы,

Д _к– оптическая плотность контроля.

Данные занести в таблицу. Обсудить полученные результаты.

Таблица 19. показатели оптической плотности исследуемых растворов и содержания неорганического фосфора в крови

.

№ пробы	Показатели оптической плотности		Содержание фосфора в пробе, мг %	Физиологическая норма, мг %
	опыт	контроль