Определение аминазота формольным титрованием

Аминным азотом или ФТА (формольно-титруемый азот) называется азот свободных аминогрупп аминокислот (пептидов). В молекуле белка аминокислоты соединены друг с другом пептидными связями, образуя полипептидные цепочки. В нерасщепленном белке количество свободных карбоксильных и аминогрупп очень мало. При гидролизе происходит разрыв пептидных связей с освобождением карбокси- и аминогрупп, и чем глубже расщеплен белок, тем больше этих групп высвобождается.

Аминный азот определяют методом формольного титрования. Пред титрованием к исследываемому раствору перед титрованием приливают формалин, формальдегид вступает в реакцию с аминогруппами аминокислот (блокирует их) в результате чего карбоксильные группы осовбождаются и их оттитровывают гидроксидом натрия.

Оборудование: мерная колба на 100 мл, бюретка (две), конические колбы на 100-150 мл (две), коническая колба на 200 мл, пипетка с одной меткой для прямого слива 10 мл (две), мерный цилиндр на 10-20 мл, стеклянная воронка для титрования, бумажные фильтры, мясорубка, электронные лабораторные весы.

Материалы и реактивы: мышечная ткань курицы, гидроксид натрия 0,1 н., свежая формольная смесь ( к 15 мл 40%-го раствора формальдегида прибавить 1 мл 1%-го раствора, фенолфталеина, 0,1 н раствор гидроксида натрия до слаборозового окрашивания) , фенолфталеин 1%-ый спиртовой раствор, свежепрокипяченая дистиллированная вода, соляная кислота 0,1 н.

Ход анализа: 1)Мышечную ткань измельчить, отвесить 10г, с запасом до второго знака в мерной колбе на 100 мл, налить на 2/3 дистиллированной воды и отстаивать 20 минут.

2) После настаивания колбу поместить в кипящую водяную баню на 15 минут, после чего остудить и довести объем раствора дистиллированной водой до метки. Содержимое колбы тщательно перемешать и отфильтровать через бумажный складчатый фильтр и стеклянную воронку в коническую колбу на 200 мл.

3) в коническую колбу на 150 мл (№1) отмерить пипеткой 10 мл фильтрата (опыт), в такую же колбу №2 - 10 мл свежепрокипяченой и остуженной дистилированной воды (контроль). В обе колбы прибавить 3 капли фенолфталеина и посредством добавления щелочи довести содержимое колб до слаборозовой окраски.Таким образом нейтрализую избыточную кислоту, присутствующую в растворе. Количество растворов, затраченных на нейтрализацию растворов не учитывается.

4) в каждую колбу прибавить 10 мл формольной смеси, причем исследуемый раствор, свободный аминогруппы делается кислым. Контрольный раствор дотитровать гидроксидом натрия до слабо розовой окраски. Количество пошедшего гидроксида натрия записать. До такой же окраски дотитровать раствор колбы №1 (количество NaOH снова записать). Если при этом раствор колбы №1 сильно увеличится, то в раствор колбы №2 надо добавить воды, чтобы объем в обеих колбах был примерно одинаковый.

5) в колбу №2 добавить еще щелочи из бюретки от чего раствор приобретет интенсивный цвет, записать количество щелочи. До такого же состояния дотитровать раствор в колбе №1, цвет в обоих колбах должен быть примерно одинаковый. Количество потраченной щелочи записать. Запись расположить следующим образом.:

Титрование контрольного раствора определяется кислотность формальдегида, следовательно, только часть гидроксида натрия, затраченное на титрование испытуемого раствора, пошла на нейтрализацию освободившихся карбоксильных групп, а другая часть пошла на нейтрализацию формальдегида. Чтобы узнать первую часть надо из гидроксида натрия, пошедшего на титрование опытного раствора, вычесть количество гидроксида натрия, затраченного на контрольный раствор.

Количество аминазота в исследуемой мышечной ткани вычислить по следующей формуле:

ФТА=(1,4*Х*V1*100)/kmV

где Х=(a+b)-(c+d),в мл

V1- общий объем экстракта из мышечной ткани, мл

V – объем фильтрата взятого для определения , мл

m- масса навески мышечной ткани, г

1,4 колличество мг азота, соответствующее 1мл 0,1 н гидроксида натрия