7. Аффинная (биоспецифическая) хроматография.
Особенность данного метода состоит в том, что разделение основано на различии не физико-химичесикх признаков молекулы (заряда, формы, размера), а специфических функциональных свойств, отличающих данное вещество от множества других.
Аффинная ( от фр.affiner – очищать ) хроматография – это метод очистки и разделения белков, основанный на их избирательном взаимодействии с лигандом ( от лат.ligare – связывать).В качестве лигандов используют соединения, взаимодействия которых с разделяемыми веществами основано на биологических функциях последних.
Так, при разделении ферментов (ферменты – белки, катализирующие важнейшие реакции в живых организмах за счет, так называемого, активного центра фермента. В активном центре содержится контактный участок, обеспечивающий связывание субстрата ферментом) лигандами служат их субстраты.
Колонку заполняют носителем, прочно связанным с определенным лигандом. Пропускают через колонку анализируемую смесь веществ, к одному из которых лиганд обладает биологическим сродством. Лиганд из всей смеси выбирает «свое» вещество и образует с ним биоспецифический комплекс. В результате этого вещество останется в колонке связанным с лигандом, а все остальные компоненты пройдут через колонку не задерживаясь. Затем с помощью буферного раствора вещество вымывается из колонки.
В настоящее время метод аффинной хроматографии применяется для выделения и очистки:
различных белковых молекул: антител (белковые вещества, образующиеся в организме при ряде заболеваний и обуславливающие иммунитет), антигенов (чуждое для организма вещество, вызывающее образование антител), ингибиторов, ферментов, гормонов ( вещества, вырабатываемые железами внутренней секреции);
гликопротеидов (белковые вещества, содержащие углеводные остатки);
полисахаридов, моносахаридов;
липидов и гликолипидов;
нуклеиновых кислот (РНК, ДНК) и нуклеотидов (структурные компоненты нуклеиновых кислот).
Вопросы для самоконтроля
Заполните таблицу:
№ |
Метод хроматографии |
На чем основано разделение смеси |
Техника выполнения |
Применение метода |
|
|
|
|
|