1. Титрование комплемента

Из коммерческого препарата комплемента, представляющего собой лиофилизирован- ную сыворотку крови морской свинки, готовят разведения 1:10, 1:15, 1:20, 1:25, 1:30, 1:35 и 1:40. К 0,2 мл каждого разведения комплемента добавляют по 0,4 мл гемолитической систе­мы (смесь равных объемов 3% суспензии эритроцитов барана в изотоническом растворе хло­рида натрия и гемолитической сыворотки кролика в тройном титре после их инкубации в те­чение 30 минут). После инкубации пробирок 30 минут при 37°С определяют титр компле­мента - наибольшее его разведение, которое вызывает полный лизис эритроцитов в гемоли­тической системе. В реакции РСК используют рабочую дозу комплемента, которая на 25% больше, чем титр комплемента.

2. Постановка основного опыта рск

Если в пробирке на первой стадии присутствуют специфические антитела (в исследуемой сыворотке) и антигены, то они образуют комплекс, который связывает комплемент. При до­бавлении на второй стадии гемолитической системы гемолиз эритроцитов не может произойти из-за отсутствия свободного комплемента, и они образуют осадок на дне пробирки. Напротив, если из-за отсутствия специфических антител в исследуемой сыворотке иммунный комплекс не образуется, то на первой стадии реакции связывания комплемента не происходит и он взаи­модействует с иммунными комплексами в гемолитической системе, вызывая гемолиз эритро­цитов. Таким образом, гемолитическая система является индикаторной, то есть показывающей произошло ли связывание комплемента на первой стадии, а это происходит при наличии спе­цифических антител в исследуемой сыворотке. В связи с этим отрицательным результатом РСК считают наличие гемолиза, положительным - отсутствие гемолиза. При этом результат оценивается как резко положительный (++++) при полном отсутствии гемолиза, положитель­ным (+++) при 25% гемолизе, слабо положительным (++) при 50% гемолизе и сомнительным (+) при 75% гемолизе.

1