ЗАНЯТИЕ № 29

ТЕМА: ЭНТЕРОВИРУСНЫЕ ИНФЕКЦИИ. ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА ЗАБОЛЕВАНИЙ, ВЫЗЫВАЕМЫХ ПИКОРНА- И РЕОВИРУСАМИ. АДЕНОВИРУСЫ.

ПЕРЕЧЕНЬ КОНТРОЛЬНЫХ ВОПРОСОВ

1. Острые вирусные кишечные заболевания. Этиология. Таксономия основных возбудителей ОКВИ.

2. Классификация, дифференцирующие признаки и сравнительная характеристика родов семейства Picornaviridae.

3. Энтеровирусы. Состав рода. Морфология, биологические свойства, антигенная структура, особенности репродукции. Роль в патологии человека.

4. Эпидемиология, патогенез и клинические формы полиомиелита. Лабораторная диагностика. Специфическая профилактика и лечение.

5. Вирусы Коксаки и ЕСНО (ЭКХО):общая характеристика, серотипы. Особенности патогенеза и клиники заболеваний, вызываемых вирусами Коксаки и ЭКХО. Схема лабораторной диагностики энтеровирусных заболеваний.

6. Калицивирусы: ультраструктура, особенности, роль в патологии человека.

7. Коронавирусы, общая характеристика, ультраструктура. Эпидемиология и клиника коронавирусных заболеваний.

8. Астровирусы. Строение, серотипы, распространение вирусов, особенности клинических проявлений кишечных заболеваний.

9. Семейство Reoviridae. Классификация. Ультраструктура. Ротавирусы. Эпидемиология, патогенез и клиника ротавирусных гастроэнтеритов. Лабораторная диагностика.

10. Аденовирусы: общая характеристика, культивирование, репродукция, состав семейства, взаимодействие с организмом человека, следствия трансплацентарного инфицирования. Аденовирусные инфекции: вирусологическая диагностика.

ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА

ХАРАКТЕРИСТИКА ПИКОРНАВИРУСОВ Таксономия и классификация семейства Picornaviridae:

род: Enterovirs полиовирусы (3 серотипа); Коксаки А (23 серотипа); Коксаки В (6 серотипов); ECHO (32 серотипа); энтеровирусы человека 68-71 (4 серотипа).

2)род: Rhinovirus ОРВИ (риниты)

3)род: Hepatavirus Гепатит А

4)род: Parechovirus Пареховирусы ( 1и 2 серотип): ОРВИ, кишечные инфекции («летняя диарея»)

5)род: Aphtovirus Ящур- лихорадка, афты - язвочки с ярко-красным воспалительным ободком слизистых полости рта и кожи рук. Зооноз ( КРС, МРС) – сырое молоко, контакт с выделениями. Вакцинация живой вакциной.

Pазмер 22-30 нм (самые мелкие РНК-содержащие вирусы). Геном - однонитевая нефрагментированная позитивная РНК; отсутствие суперкапсида. Тип симметрии - кубический, количество капсомеров – 60

Сравнительная характеристика энтеровирусов *

Способы культивирования:	В. полиомиелита	Вирусы Коксаки	Вирусы ЭКХО
куриный эмбрион	нет	нет	нет
культура клеток	да	да	да
лаборат. животные	нет	Да Коксаки А (мыши).	нет
Наличие сероваров	I, II, III	23 серотипа	6 серотипов
Источник инфекции	человек	человек	человек
Пути передачи	фекально-оральный, во время эпидемии воздушно-капельный	фекально-оральный и воздушно-капельный	фекально-оральный и воздушно-капельный
Роль в патологии человека	Полиомиелит, вялые параличи, серозный менингит, энцефалит	Полиомиелитоподобные заболевания, серозный менингит, миелиты (вирусы Коксаки А и В; ECHO) Эпидемическая миалгия - Борнхольмская болезнь (вирусы Коксаки А и В; ECHO) Герпангина (Коксаки А и Коксаки В) Энцефаломиокардиты новорожденных -Коксаки В -летальность – 60-80%. «Летний грипп», гастроэнтериты, кореподобные и краснухоподобные экзантемы, ОРЗ, миокардиты.

* Заполняется студентом самостоятельно.

ЦПД -	ЦПД+
Увеличение 40 Х

Лабораторная диагностика полиомиелита

I . Вирусологический метод : исследуемый материал фекалии, смывы и мазки из носоглотки, кровь, при серозных менингитах – ликвор

• 1 этап. Подготовка исследуемого материала: суспендирование, центрифугирование и обработка антибиотиками.

• 2 этап. Заражение культур клеток Hela, ФЭЧ (фибробласты эмбриона человека) и др. Инкубация в течение 3-7 дней с ежедневным осмотром.

• 3 этап Выявление вируса по ЦПД. Пассажи вируса на культурах тканей для дифференциации ЦПД вируса от возможного токсического действия исследуемого материала. Характер ЦПД: полная дегенерация клеток

ЦПД -	ЦПД+

Цитопатогенное действие вируса (ЦПД) можно наблюдать не только при микроскопии гистологических препаратов, но и по образованию «бляшек», или «негативных» колоний – ограниченных участков разрушенных вирусами клеток, культивируемых на питательной среде под агаровым покрытием. При добавлении индикатора нейтрального красного, живые клетки, образующие кислые продукты жизнедеятельности окрашиваются в розовый цвет. Погибшие клетки не изменяют цвет индикатора и выглядят как светлые пятна - «бляшки» на фоне окрашенных живых клеток. Один вирион образует потомство в виде одной «бляшки». Метод «бляшек» используют для индикации вирусов, а также для определения их количества в исследуемом материале.

4 этап. Титрование вируса для выбора рабочей дозы перед постановкой реакции нейтрализации.

Результат	Разведения вируссодержащего материала					Контроль культуры клеток
	1/10	1/100	1/1000	1/10000	1/100000
ЦПД +/-

Титр вируса: 1/1000 Рабочая доза для РН: 1/100

А - цитопатогенный эффект (ЦПЭ) или цитопатогенное действие (ЦПД) в результате размножения вирусов; Б - ЦПЭ отсутствует в результате предварительной нейтрализации вирусов антителами.

5 Этап. Идентификация (серотипирование) вируса в рн.

Реакция нейтрализации вирусов в культуре клеток: вирусосодержащий материал обрабатывают смесью диагностических сывороток, содержащих антитела к различным вирусам. По отсутствию ЦПД- нейтрализации определяют семейство, а затем и серотип вируса.

1. Рн с поливалентной сывороткой.

Исследуемый материал: вирусосодержащий материал Диагностический препарат: поливалентная сыворотка диагностическая сыворотка, содержащая антитела к вирусу полиомиелита I, II и III серотипов

Дополнительные ингредиенты реакции: физиологический раствор, индикатор нейтральный красный

Реакция инкубируется в термостате в течение нескольких дней. Учет результатов проводится после появления ЦПД в пробирке «Контроль дозы вируса»

Результат	Опыт (100 доз вируса +сыворотка + культура клеток)	Контроль дозы вируса (100 доз вируса + культура клеток)	Контроль культуры клеток
ЦПД +/-

Вывод: исследуемый материал содержит вирус полиомиелита.

2. Рн с моновалентными сыворотками.

Результат	100 доз + моновалентные сыворотки (S)			Контроль дозы вируса	Контроль культуры клеток
	SI типа	SII типа	SIII типа
ЦПД +/-

Вывод: исследуемый материал содержит вирус полиомиелита I серотипа.

II. Серодиагностика исследование парных сывороток в рн бляшкообразования по Дюльбекко

Исследуемый материал: кровь (сыворотка) обследуемого Диагностический препарат: диагностикум из вирусов полиомиелита I, II и III серотипов Дополнительные ингредиенты реакции: физиологический раствор, индикатор нейтральный красный

1-я сыворотка

Серотип вируса	Разведения сыворотки					Контроли
	1/10	1/20	1/40	1/80	1/160	клеток	вирусов	сыворотки
Полиовирус I
Полиовирус II
Полиовирус III

Результат: титр антител к полиовирусу I типа = 1/20

2-я сыворотка

Серотип вируса	Разведения сыворотки					Контроли
	1/10	1/20	1/40	1/80	1/160	клеток	вирусов	сыворотки
ПолиовирусI
ПолиовирусII
ПолиовирусIII

Результат: титр антител к полиовирусу I типа = 1/80

Вывод: Увеличение титра в четыре раза свидетельствует о заболевании полиомиелитом.

Специфическая профилактика полиомиелита

Вакцина Солка инактивированная формалином трехвалентная вакцина (ИМОВАкс ПОЛИО Авентис Пастер про-во Франция) вводится внутримышечно, трехкратно

Вакцина Сэбина живая трехвалентная вакцина ( ПОЛИО СЕБИН ВЕРО Авентис Пастер про-во Франция) вводится через рот (капли), может давать осложнения – полиомиелит 1 случай на 10^6). Прививки с 3месяцев.

РЕОВИРУСЫ

Состав семейства: 1) род: Reovirus - ОРВИ 2) род: Coltivirus включает большое количество вирусов патогенных для животных, у человека вызывают клещевая лихорадкуа колорадо. 3) Род Rotavirus – вирусные гастроэнтериты у детей 6-24 месяцев

Вирион ротавирусов имеет сферическую форму, нуклеокапсид состоит из двух слоев. Имеют вид колёс. Тип симметрии – кубический. Суперкапсид отсутствует. Геном вириона, представлен двунитевой фрагментированной РНК (11 фрагментов). Каждый фрагмент уникален и кодирует индивидуальный белок. В составе вириона имеется 8 белков (VP1-VP8). - VP7 является типоспецифическим протективным антигеном- VРЗ обладает гемагглютинирующим свойством, отвечает за проникновение вируса в клетку и его вирулентность .По белкам VP3 и VP7 ротавирусы делят на 4 серотипа.

Методы культивирования: Вирусы выделяют в культурах клеток, а также организме новорожденных мышей.

Наличие ЦПД (особенности): ЦПД в виде полной дегенерации клеток выявляется через 2-3 недели после заражения

Локализация в организме человека: Первичная репродукция ротавирусов происходит в цитоплазме энтероцитов двенадцатиперстной кишки. При этом микроворсинки щеточной каймы клеток укорачиваются, становятся неровными или полностью исчезают, в тяжелых случаях развиваются некротические изменения стенки кишечника. Нарушается процесс всасывания простых сахаров. Воспалительные явления усиливают перистальтику кишечника, что способствует развитию диарейного синдрома и появлению рвоты.

Источник инфекции: человек Пути передачи: фекально-оральный

ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА АДЕНОВИРУСНЫХ ИНФЕКЦИЙ

Простые вирусы, форма – икосаэдра (252 капсомера), диаметр 70 – 90 нм; от 12 вершин икосаэдра отходят фибры (нити). Двухцепочечная линейная ДНК, Источник инфекции - больной человек, в том числе со скрытой ее формой. Заражение происходит воздушно-капельным, контактно-бытовым путем, через воду в плавательных бассейнах. Возможен и фекально-оральный механизм передачи. Болеют в основном дети младшего возраста. Тропизм к лимфоидной ткани -- свойство аденовирусов. Инкубационный период 6-9 дней. Для заболеваний характерно преобладание респираторного (пневмонии, бронхиолиты, другие ОРВИ – серовары 1-7), кишечного (гастроэнтериты – серовары 40,41) или конъюнктивального синдрома (фагингоконъюнктивиты). Также геморрагические циститы (11,21), менингоэнцефалиты (2,6), генерализованные инфекции (34,35,39). Для аденовирусной инфекции характерно сочетанное поражение слизистой оболочки и лимфоидных тканей миндалин, аденоидов и конъюнктивы глаза (фарингоконъюнктивальная лихорадка).