Занятие № 1

Микробиология как наука Бактериоскопический метод исследования. Простые методы окраски Практические навыки, осваиваемые студентами на занятии:

1. Приготовление мазков и окраска их с применением простого метода.

2. Подготовка предметного стекла к работе (обезжиривание).

3. Приготовление мазка из агаровой культуры стафилококка:

1. окраска приготовленного мазка метиленовым синим;

2. микроскопия под иммерсией;

3. зарисовка препарата в лабораторную тетрадь.

4. Приготовление мазка из бульонной культуры кишечной палочки:

1. окраска приготовленного мазка водным фуксином;

2. микроскопия под иммерсией;

3. зарисовка препарата в лабораторную тетрадь.

Приготовление мазка

1. На обезжиренное предметное стекло нанесите петлей каплю физиологического раствора.

2. В правую руку возьмите бактериологическую петлю.

3. Простерилизуйте петлю:

• вносим в пламя горелки – строго вертикально (прокаливам до раскаливания);

• затем переводим в горизонтальное положение и проносим петлю через пламя, перемещая ее по мере раскаливания рабочей части;

• проводим петледержателя несколько раз через пламя.

4. В левую руку возьмите пробирку с культурой.

5. Мизинцем правой руки обхватите пробку и откройте пробирку.

6. Пронесите открытую часть пробирки через пламя спиртовки, прожигая края.

7. Введите петлю в пробирку, охладите ее, касаясь изнутри стенок пробирки.

8. Снимите петлей небольшое количество культуры с поверхности агара (либо сделайте забор материала из жидкой среды).

9. Аккуратно извлеките петлю из пробирки.

10. Пронесите открытую часть пробирки через пламя спиртовки, прожигая края, и закройте пробирку пробкой и поставьте в штатив.

11. Петлю погрузите в каплю физраствора, равномерно распределите по стеклу, делая тонкий мазок в виде небольшого круга (d2см). Если культура выращена в жидкой среде, физраствор на предметное стекло не наносят.

12. Простерилизуйте петлю в пламени и поставьте в штатив.

13. После полного высушивания мазок фиксируют.

Простые методы окраски

1. После охлаждения предметного стекла нанесите 1-2 капли водного раствора фуксина (для окраски кишечной палочки) или метиленового синего (для окраски стафилококка) на фиксированный мазок (чтобы он был полностью покрыт краской).

2. Окрашивайте в течение 2-3 минут.

3. Смойте краску водой.

4. Просушите препарат фильтровальной бумагой.

Водный раствор фуксина окрашивает микроорганизмы в красный цвет.

Раствор метиленового синего окрашивает микроорганизмы в синий цвет.

Занятие № 2

Морфология и ультраструктура бактериальной клетки Окраска по Граму

Практические навыки, осваиваемые студентами на занятии:

1. Приготовление мазка из смеси культур стафилококка и кишечной палочки (см. Занятие №1).

2. Окраска по Граму, микроскопия и зарисовка препарата.

Сложные методы окраски

Алгоритм окраски по Граму

1. На зафиксированный мазок поместите сухую фильтровальную бумагу, пропитанную раствором генцианвиолета.

2. Нанесите на нее 2-3 капли воды так, чтобы бумага хорошо намокла и плотно прилегала к поверхности предметного стекла.

3. Через 2 мин снимите фильтровальную бумагу, слейте остатки красителя в кювету.

4. Нанесите раствор Люголя на 1 мин, слейте в кювету.

5. Обесцвечивание – нанесите на мазок несколько капель спирта на 20 сек.

6. Тщательно промойте препарат водой.

7. Нанесите водный раствор фуксина на 2 мин.

8. Промойте препарат водой.

9. Просушите фильтровальной бумагой.

Грамположительные микроорганизмы окрашиваются в фиолетовый цвет.

Грамотрицательные микроорганизмы окрашиваются в красный цвет.

Занятие № 3