1.5. Работа с микроскопом.

Основные прави­ла работы с микроскопом. Место для микроскопа выбирают подальше от прямого солнечного света. Работа на столе с темной поверхно­стью меньше утомляет глаза. Лучше смотреть в окуляр левым глазом, не закрывая правого.

В случае работы с бинокулярной насадкой сначала регулируют расстояние между окулярами в соответствии с расстоянием между глазами наблюдателя так, чтобы поля зрения обоих окуляров слились в одно.

Переносить микроскоп необходимо двумя руками: одной держать штатив, другой — основание микроскопа. Следует предохранять микроскоп от толчков, соприкос­новения с сильнодействующими веществами типа кис­лот, щелочей. Не рекомендуется вынимать окуляр из трубы, чтобы не загрязнять пылью трубу и объективы. Во время работы желательно защищать микроскоп от дыхания, так как конденсация паров ведет к его порче.

Линзы должны быть всегда чистыми. Микроскоп сле­дует хранить в чехле. Нельзя касаться пальцами опти­ческих поверхностей.

Работа с иммерсионной системой мик­роскопа. При работе с иммерсионным -объективом (У=90х; А=1,25) необходимо установить зеркало плос­кой стороной и поднять конденсор.

Каплю иммерсионной жидкости (кедрового масла) наносят на препарат, не размазывая ее по стеклу. По­гружать в иммерсионную жидкость можно только им­мерсионные объективы (не сухие).

Глядя сбоку на предметное стекло, опускают объ­ектив до поверхности масляной капли. Далее, глядя в окуляр, опускают объектив осторожно при помощи мак­ровинта, следят при этом за появлением изображения, а затем, когда оно появится, пользуются микровинтом. Если изображение нерезкое, тусклое или плывет, что-то сделано неправильно: загрязнена фронтальная линза объектива, мешают пузырьки воздуха в масле, случай­но закрыта диафрагма, сдвинута лампа или зеркало. Причину некачественного изображения надо устранить.

По окончании работы поднимают тубус, снимают препарат и осторожно протирают фронтальную линзу объектива хлопчатобумажной салфеткой, смоченной очи­щенным бензином.

Иммерсионную жидкость (кедровое масло) рекомен­дуют хранить в специальных двухкамерных масленках. В наружную камеру наливают ксилол или очищенный бензин для очистки объективов от масла, во внутрен­нюю - кедровое масло. Камеру с маслом герметично закрывают пробкой, в которую вставляют стеклянную палочку для нанесения капли масла на препарат.

Установка освещения. Удобнее пользоваться искусственным источником света — он более постоянен, чем дневной, лучше освещает объект, что важно при работе с сильными объективами (90х).

Освещение препарата по Келеру. Рациональное ос­вещение объекта достигается при использовании осве­тителей типа ОИ-7, ОИ-9 и ОИ-19. Осветитель с низко­вольтной лампочкой устанавливают на расстоянии 25-30 см от микроскопа с помощью соединительной планки (крестовины). Полевая диафрагма осветителя открыта; используют объектив х8, зеркало с плоской поверхно­стью, конденсор поднят.

Препарат в поле зрения микроскопа фокусируют при открытых диафрагмах осветителя и конденсора. Из ос­ветителя удаляют матовое стекло. Полевую диафрагму осветителя закрывают. На зеркало помещают белый лист бумаги для получения четкого изображения нити лампы осветителя.

Движением зеркала перемещают световой поток в поле зрения микроскопа. Фокусируют препарат. Опус­кают конденсор до тех пор, пока изображение (проек­ция) краев полевой диафрагмы осветителя в плоскости препарата не станет четким. Центрируют легкими дви­жениями зеркала изображение отверстия диафрагмы. Наблюдая в микроскоп, постепенно открывают полевую диафрагму осветителя так, чтобы освещенный круг ее заполнил все поле зрения микроскопа; лучше, если он немного выйдет за пределы поля зрения.

Положение осветителя, зеркала, конденсора микро­скопа в дальнейшем не менять.

Установку света по Келеру рекомендуют также и при темнопольной и фазово-контрастной микроскопии.

Измерение объектов. Измерять клетки мик­роорганизмов (в мкм) можно на фиксированных и жи­вых препаратах с помощью шкалы окулярного микро­метра - окулярной линейки. У кокков определяют диа­метр клеток, у других форм бактерий - длину и ши­рину.

Окулярная линейка — круглая стеклянная пластин­ка, посредине которой нанесена шкала делений (50 или 100 делений) общей длиной 5 мм. Вывинчивают линзу окуляра и окулярную линейку вставляют шкалой вверх на диафрагму окуляра. Ставят препарат и определяют, скольким делениям линейки соответствует длина и ши­рина клетки. Измеряют не менее 10-20 клеток.

Чтобы рассчитать истинные размеры клеток, определяют цену деления окулярной линейки с помощью объектного микрометра, который представляет собой металлическую пластинку в форме предметного стекла с отверстием в центре; в отверстие помещено стекло с линейкой (шкала из 100 делений). Общая длина шкалы объектного микрометра 1 мм, величина одного деления 10 мкм (0,01 мм).

Объектный микрометр помещают вместо препарата на столик микроскопа, фокусируют изображение линей­ки при малом увеличении, затем перемещают в центр поля и меняют объектив на тот, при котором измеряли клетки. Перемещая столик микроскопа и поворачивая окуляр, устанавливают объектный и окулярный микро­метры так, чтобы их шкалы были параллельны и одна перекрывала другую. Определение цены деления оку­лярного микрометра проводят по принципу нониуса, т. е. совмещают одну из черт шкалы окулярного мик­рометра с чертой объектного микрометра и находят сле­дующее совмещение. Допустим, в двух делениях объект­ного микрометра (20 мкм) умещается пять делений окулярного микрометра, тогда одно деление окулярного микрометра при данном увеличении равняется 4 мкм (20:5).

Зная, скольким делениям окулярной линейки соот­ветствует длина и ширина изучаемых клеток, умножа­ют цену деления окулярного микрометра на эти числа. Вычисленные значения цены делений линейки справед­ливы только для данной системы окуляр - объектив.

Задание:

Согласно правилам установить световой микроскоп, фокусировать препарат. Отрегулировать положение осветителя, зеркала, конденсора.

Контрольные вопросы:

1. Где должен устанавливаться микроскоп?

2. Как устанавливается бинокулярная насадка?

3. Каковы меры предосторожности при работе с микроскопом?

4. Назовите правила работы с иммерсионной системой.

5. Как проводится установка освещения по Келеру?