Московский государственный университет им. М.В.Ломоносова

Химический факультет

Кафедра химии природных соединений

Фруктозо-1,6-бисфосфатальдолаза класса I как белок ответа на стресс в e.Coli

(Обзор литературы + исследовательский проект)

Курсовая работа

по химической биологии

студентки 110 группы

Гасановой Д.А.

Научный руководитель:

к.х.н., доцент

Р

Москва 2012 г.

одина Е.В.

Оглавление

		Стр.
	Список использованных сокращений	3
1.	Введение	4
2.	Обзор литературы: Фруктозо-1,6-бисфосфатальдолаза класса I как возможный белок ответа на стресс в Е. coli	4
2.1.	Классификация альдолаз	4
2.2.	Экспрессия FbaB в различных организмах	6
2.3.	Предполагаемые функции FbaB в бактериальной клетке	8
3.	Исследовательский проект: Выявление функциональной роли фруктозо-1,6-бисфосфатальдолазы класса I в E.coli	9
3.1.	Определение видов стресса, в ответе на которые в E.coli может участвовать FbaB	10
3.2.	Определение экспрессии FbaB на разных стадиях клеточного цикла	11
3.3.	Определение каталитической активности FbaB на разных стадиях клеточного цикла	12
3.4.	Локализация пространственного распределения FbaB в клетке	12
3.5.	Выявление белковых партнёров FbaB в E.coli	13
4.	Экспериментальная часть: Влияние нокаута гена FbaB на адаптацию E.coli к различным видам стресса	14
4.1.	Оборудование и реактивы	14
4.2.	Методики	14
4.3.	Результаты	15
5.	Список литературы	16

Список использованных сокращений.

FbaA – фруктозо-1,6-бифосфатальдолаза класса II (белок)

FbaB – фруктозо-1,6-бифосфатальдолаза класса I (белок)

fbaB – ген, кодирующий FbaB

ΔfbaB – штамм клеток E.coli с нокаутом гена fbaB

WT – нативный штамм E.coli

FBP­­– фруктозо-1,6-бисфосфат

GFP – зелёный флюоресцентный белок

LB – среда Луриа-Бертани, стандартная для культивирования клеток E.coli

ЭДТА ­– этилендиаминтетраацетат

1. Введение

Фруктозо-1,6-бисфосфатальдолазы – ферменты, участвующие в гликолизе и глюконеогенезе. Они присутствуют во всех известных живых организмах и подразделяются на два класса, I и II, различающиеся по структуре и механизму каталитического действия. Большинство эубактерий в качестве основной (или единственной) гликолитической альдолазы используют белок FbaA, то есть альдолазу класса II. Однако в геномах некоторых бактерий, включая E.coli, имеется также ген альдолазы класса I, или FbaB. В нормальных условиях роста эта альдолаза является минорной формой. Повышенная экспрессия FbaBнаблюдается в стрессовых условиях: при недостатке питательных веществ или воды в питательной среде, при переходе в стационарную фазу роста и т.п. Этот факт позволяет предположить, что FbaB в этих видах бактерий, помимо основной каталитической функции, выполняет также роль адаптивного белка, помогающего бактерии выживать в стрессовых условиях. В данной работе приведен обзор литературы и предложен проект исследования с целью выяснить, в каких именно видах стресса участвует FbaB, а также выявить другие возможные функции этого фермента в E.coli.