Настройка и правила работы с микроскопом

Протерев мягкой тряпочкой окуляр, объектив и зеркальце, мик­роскоп ставят у источника света. Следует избегать прямых солнеч­ных лучей, так как этот свет слишком ярок и опасен для зрения, особенно при работе с малым увеличением. Используя малое увеличение, при искусственном освещении сле­дует установить расстояние между источником света и зеркальцем примерно 1/4 м. При искусственном освещении используют вогнутую поверхность, при дневном свете - плоское зеркальце.

Конденсор, как правило, устанавливают на одном уровне с пред­метным столиком. Для перемещения конденсора вверх и вниз исполь­зуют специальный винт, расположенный под столиком микроскопа. В верхнем крайнем положении винта конденсор поднимается до уровня предметного столика. При подъеме конденсора падающие лучи, рассеи­ваются, при опускании - концентрируются на ограниченном участке препарата. В. некоторых случаях целесообразней работать с опущен­ным конденсором, так как при этом достигается оптимальное осве­щение препарата.

При помощи вмонтированной в конденсор ирисовой диафрагмы регу­лируется величина отверстия, через которое проходит свет. Исполь­зуя рычажок, расположенный в нижней части оправы конденсора, мож­но сближать или раздвигать металлические пластинки, регулируя тем самым диаметр отверстия. При движении рычажка по часовой стрелке отверстие расширяется, против часовой стрелки - уменьшается. Обыч­но работают с полностью открытой диафрагмой, таким образом дос­тигается максимальная четкость изображения. Однако при рассмотре­нии неокрашенных препаратов часто целесообразней уменьшить прос­вет диафрагмы и опустить конденсор. Если препарат изучают при ярком солнечном освещении или чрез­мерно яркой лампе накаливания, используют светофильтры (матовый и синий), которые помешают в кольцо, привинченное под оправой конденсора.

Микроскопирование препарата начинают с установки ос­вещения. Поставив малое увеличение и самую широкую диафрагму и прибли­зив тубус на расстояние примерно 2 см к столику, начинают перемещать зеркальце так, чтобы, смотря в окуляр, увидеть равномер­но яркий, матовый круг. После чего, приподняв тубус на 2-3 см, помещают на столик предметное стекло с изучаемым объектом так, чтобы он находился над серединой отверстия в предметном столике.

Рассматривание объекта следует обязательно начинать с малого увеличения. Нужно помнить, что при большом увеличении труднее на­вести на фокус, поле зрения мало, а ясность изображения меньше. Кроме того, при малом увеличении не приходится приближать объектив к исследуемому предмету, отсюда исчезает опасность раздавить препарат и испортить линзу. Большое увеличение употребляют глав­ным образом для рассматривания деталей строения клетки. Для ус­тановки малого увеличения поворачивают револьверную головку до тех пор, пока объектив не попадет в паз тубуса, что можно опреде­лить по щелчку. Глядя на предметный столик и препарат сбоку, опус­кают тубус с помощью винта грубой наводки (макровинта) до тех пор, пока объектив с малым увеличением не окажется примерно в 6-8 мм от препарата, затем, глядя в микроскоп, производят наводку на резкость макровинтом до тех пор, пока объектив не попадет в фокус.

Перемещая препарат на предметном столике, рассматривают его детали по всей площади. Перемещение препарата можно осуществлять движением предмет­ного столика с помощью двух винтов, закрепленных на его боковых поверхностях. Движение одного винта позволяет сдвигать столик вправо и несколько вперед, другого - влево и несколько назад. Кро­ме того, перемещение препарата можно производить рукой, добиваясь, таким образом появления нужного поля зрения. Для практики надо помнить, что изображение предмета под микроскопом является обрат­ным, т.е. то, что лежит на самом деле справа, под микроскопом будет казаться находящимся слева, то, что мы видим сверху, по­мешается в действительности снизу. Поэтому, когда мы хотим пере­двинуть предмет исследования вправо, стекло нужно передвинуть вле­во и наоборот.

После того, как будет найдено нужное для изучения поле зре­ния, можно укрепить препарат на рабочем столике с помощью клемм. Для работы при большом увеличении устанавливают в центре по­ля зрения участок препарата, который следует изучить, затем пово­рачивают револьверную головку до тех пор, пока объектив большого увеличения не попадет в паз. Если на малом увеличении фокус уже был установлен, то при по­вороте револьверной головки объектив большого увеличения автома­тически установится приблизительно в фокусе.

Фокусирование всегда производится движением объектива вверх с помощью винта тонкой настройки. Если при движении объектива с линзами большого увеличения фокус не устанавливается, делают сле­дующее: глядя на предметный столик сбоку, опускают тубус микро­скопа до тех пор, пока линза почти не коснется препарата, далее, поворачивая винт тонкой настройки, медленно поднимают объектив и добиваются появления четкого изображения. Для того, чтобы получить более сильное увеличение, чем при работе с обычным объективом, необходимо использовать масляно-иммерсионную линзу. Способность линзы собирать свет в значитель­ной степени усиливается, если между линзой объектива и покровным стеклом поместить жидкость. Жидкость должна иметь тот же коэффициент преломления, что и сама линза. В качестве жидкости используют воду, глицерин и наиболее часто - кедровое масло.

При работе с объективом 90х на покровное стекло препарата наносят каплю иммерсионного масла, после чего с помощью макровин­та объектив осторожно опускают до соприкосновения его фронтальной линзы с иммерсионной жидкостью. Плавно вращая микровинт, доби­ваются появления четкого изображения. Закончив работу, иммерсион­ную жидкость удаляют мягкой тряпочкой с линзы и покровного стекла.

Работая с микроскопом, нужно помнить, что при переносе его с места на место следует брать только за колонку тубусодержателя и поддерживать другой рукой снизу за башмак. По окончании работы необходимо опустить конденсор, объективы отодвинуть в сторону от тубуса или поставить малое увеличение. Если запачканы объективы, зеркало или столик микроскопа, их следует вытереть. Для очистки оптики, до и после работы с микроскопом нельзя использовать писчую или фильтровальную бумагу, плотную и грязную ткань. Жела­тельно для этих целей иметь мягкую батистовую или марлевую тря­почку или кусочек мягкой замши. После завершения указанных про­цедур микроскоп следует отнести в предназначенное место.

ИЗУЧЕНИЕ ОБЩЕЙ МОРФОЛОГИИ КЛЕТКИ ПЕЧЕНИ АКСОЛОТЛЯ (препарат 1)

(окрашено гематоксилин -эозином)

При изучении цитологических объектов часто используют клет­ки беспозвоночных (аскариды и др.) и низших позвоночных - ам­фибий (аксолотль), так как они имеют более крупные размеры.

Клетки печени - гепатоциты составляют основную массу паренхимы печени. Гепатоциты аксолотля - это довольно крупные клетки, имеющие на срезе пяти-шестиугольные очертания. При малом увеличении в центре клетки видно округлое ядро, иногда встречаются и двуядерные клетки. Ядра окрашены гематоксилином в фиолетовый цвет. При большом увеличении в ядре можно обнаружить глыбки хро­матина и одно-два ядрышка. Цитоплазма клеток окрашена преиму­щественно в розовый цвет эозином, хотя в ней присутствуют и слабо базофильные (бледно-фиолетовые) зернышки. Плазматическая мембрана клетки имеет субмикроскопическую толщину, однако место ее расположения - граница цитоплазмы - хорошо видна.