Клинико-диагностическое значение.

Повышение содержания малонового диальдегида в эритроцитах и биологических жидкостях служит показателем процессов, сопровождающихся усилением свободного окисления липидов.

Определение активности каталазы эритроцитов крови

Каталаза эритроцитов наряду с другими ферментами входит в антиоксидантную систему, предохра-няющую клетки от усиленного перекисного окисления.

Каталаза расщепляет перекиси с образованием воды и атомарного кислорода.

Кроме этого, она катализирует окисление этанола в присутствии перекиси водорода до ацетальальдегида с образованием воды, чем участвует в обезвреживании этанола.

Принцип метода: основан на определении количества перекиси водорода, разложенной ферментом за определенный промежуток времени по уравнению:

КМпО₄ + 5 Н₂О *+ 4 Н₂SО₄ КНSО₄ + 2Мп SО₄ + 8Н₂О+ 5О₂

Активность каталазы выражают с помощью каталазного числа и показа­теля каталазы.

Каталазным числом называют количество миллиграммов перекиси водорода, которое разлагается в 1 мкл крови.

О количестве расщепленной перекиси водорода судят по разности количества КМпО₄, израсходованного на титрование до и после действия каталазы.

Реактивы: 1. Перекись водорода – 1 % раствор.

2. Серная кислота – 10 % раствор.

3. Перманганат калия – 0,1 Н раствор.

Ход определения.

В мерную колбу на 100 мл наливают 10 мл дистиллированной воды и вносят 0,1 Мл крови,

Микропипетку несколько раз промывают водой и доливают дистиллированной водой до метки.Разведенную кровь (1:1000) взбалтывают, наливают по I мл в две колбы, приливают по 7 мл дистиллированной воды; в опытную пробу добавляют 2 мл 1 % Н₂О₂, а в контрольную - 5 мл 10 %раствора серной кислоты. Действие каталазы в кислой среде (контрольной пробе) прекращается, так как она действует при рН 7,4.

Колбы оставляют при комнатной температуре на 30 мин. Затем приливают в опытную колбу 5 мл 10 % раствора серной кислоты, а в контрольную - 2 мл 1% раствора Н₂О_2.

Содержимое каждой колбы титруют 0,1 Н раствором перманганата калия до розовой окраски.

Рассчитывают каталазное число (КЧ) по формуле:

КЧ = (А - В) * 1,7

Где: А - количество 0,1 Н раствора перманганата калия, пошедшее на титрование контрольной пробы, мл.

В - количество 0,1 Н раствора перманганата калия, пошедшее на титрование контрольной пробы.

На титрование контрольной пробы, где каталаза разрушена, пойдет больше раствора перманганата калия, чем на титрование опытной пробы.

Полученную разность умножают на 1,7 и получают каталазное число.

В норме каталазное число колеблется от 10 до 15 единиц.

Клинико-диагностическое значение.

Понижение активности наблюдается при раке, анемии, туберкулёзе.

МЕТОДИЧЕСКАЯ РАЗРАБОТКА ДЛЯ СТУДЕНТОВ

К ПРАКТИЧЕСКОМУ ЗАНЯТИЮ N 8. 4 курс 1 семестр

ТЕМА: «ИССЛЕДОВАНИЕ ПРОДУКТОВ ПОЛ И ПОКАЗАТЕЛЕЙ АНТИОКСИДАНТНОЙ СИСТЕМЫ ЗАЩИТЫ. ОПРЕДЕЛЕНИЕ АКТИВНОСТИ МАЛОНОВОГО АЛЬДЕГИДА, АКТИВНОСТИ КАТАЛАЗЫ. КДЗ ИССЛЕДОВАНИЯ»

МЕСТО ПРОВЕДЕНИЯ: 26 кабинет. ВРЕМЯ ЗАНЯТИЯ: 180 минут.

В соответствии с Государственным образовательным стандартом после изучения раздела «Обмен липидов в норме и патологии» медицинский лабораторный техник должен уметь:

• проводить исследование продуктов ПОЛ;

• проводить исследование показателей антиоксидантной системы защиты организма;

• интерпретировать полученные результаты исследования;

• заполнять бланк анализа.

должен знать:

• образование, химический состав, обмен транспортных форм липидов: ХМ, ЛОНП, ЛНП, ЛВП;

• сущность ПОЛ, его значение;

• пути нарушения обмена липидов − нарушение переваривания и всасывания, жировая дегенерация

печени, гиперлипопротеинемии.

ЦЕЛИ: 1. Сформировать умения определять показатели пол и антиоксидантной защиты:

малоновый диальдегид и активность каталазы.

2. Систематизировать знания о ПОЛ и антиоксидантной защите.

3. Повторить раздел «Витамины».

4. Научиться готовить рабочие реактивы.