- •По форме выделяют следующие основные группы микроорганизмов.
- •Методы окраски
- •Клеточные стенки прокариот
- •Техника окрашивания
- •Метод выявления капсулы по Бурри-Гинса
- •Ворсинки (фимбрии, пили)
- •Микроскопия в тёмном поле.
- •Фазово-контрастная микроскопия.
- •Окраска по методу Циля-Нильсена
- •Цпм и Цитоплазма
- •Метод окраски по Нейссеру
- •Метод Ожешки
Фазово-контрастная микроскопия.
Фазово-контрастное устройство состоит из фазового конденсора (пропускает волны с одинаковой фазой) и оптического устройства под окуляр. С помощью такого устройства различия в фазе световых лучей, возникающие при прохождении их через прозрачные объекты, превращаются в амплитудные, и в результате объекты становятся контрастными. В обычном светлопольном микроскопе амплитуда световой волны, проходящей через клетки микроорганизмов, почти не меняется, поэтому объекты плохо различимы или даже невидимы. Поле зрения кажется почти однородным.
Окраска по методу Циля-Нильсена
Фиксированный на пламени горелки мазок окрашивают в течение 3 – 5 мин. раствором карболового фуксина Циля или окрашенной фуксином бумажкой с подогреванием до появления паров, но не доводя краситель до кипения.
Дают препарату остыть, бумажку снимают, сливают избыток красителя, препарат промывают водой.
Окрашенный препарат обесцвечивают 5%-ным раствором серной кислоты в течение 3 – 5 с или 96° этиловым спиртом, содержащим 3% по объему хлористоводородной кислоты, несколько раз погружая стекло с мазком в стаканчик с солянокислым спиртом.
После обесцвечивания остаток кислоты сливают и тщательно промывают препарат водой.
Докрашивают дополнительно метиленовым синим Леффлера 3 – 5 мин.
Окрашенный препарат промывают водой, подсушивают и микроскопируют.
При окраске препаратов кислоустойчивые бактерии окрашиваются фуксином в рубиново-красный цвет и не обесцвечиваются кислотой.Некислотоустойчивые бактерии, а также элементы ткани и лейкоциты под действием кислоты обесцвечиваются и приобретают цвет дополнительного красителя.
Таблица 2.2. Основные различия между прокариотами и эукариотами |
||
Признак |
Прокариоты |
Эукариоты |
Организмы |
Бактерии |
Протоктисты, грибы, растения и животные |
Размеры клеток |
Диаметр в среднем составляет 0,5-10 мкм |
Диаметр обычно составляет 10-100 мкм; объем клетки, как правило, в 1000-10 000 раз больше, чем у прокариот |
Форма |
В основном одноклеточные |
В основном многоклеточные (за исключением Protoctista, многие из которых одноклеточные) |
Возникновение в процессе эволюции |
3,5 млрд. лет назад |
1,2 млрд. лет назад; произошли от прокариот |
Клеточное деление |
В основном простое деление пополам; веретено не образуется |
Митоз, мейоз или сочетание этих способов деления; веретено образуется |
Генетический материал |
Кольцевая ДНК свободно плавает в цитоплазме; ДНК не связана с белками или РНК; хромосом нет |
ДНК линейная и локализована в ядре; ДНК связана с РНК и белком; хромосомы имеются |
Синтез белков |
70S-рибосомы (мелкие); Эндоплазматического ретикулума нет (различия и по многим другим деталям белкового синтеза, включая чувствительность к антибиотикам; синтез белков у прокариот, например, ингибируется стрептомицином) |
80S-рибосомы (крупные); Рибосомы могут быть прикреплены к эндоплазматическому ретикулуму |
Органеллы |
Органелл мало; Ни одна из них не имеет оболочки; Внутренние мембраны встречаются редко; в тех случаях, когда они есть, они ассоциированы с процессами дыхания и фотосинтеза |
Органелл много; Органеллы окружены мембранами, например, ядро, митохондрии, хлоропласты (двойной мембраны); Множество органелл, окруженных одинарной мембраной, например аппарат Гольджи, лизосомы, вакуоли, микротельца, эндоплазматический ретикулум |
Клеточные стенки |
Жесткие, содержат полисахариды и аминокислоты; основной опорный материал – муреин |
Клеточные стенки зеленых растений и грибов жесткие, содержат полисахариды; основной опорный материал клеточной стенки у растений – целлюлоза, у грибов – хитин (у клеток животных клеточной стенки нет) |
Жгутики |
Простые, микротрубочек нет; расположены внеклеточно (не окружены плазматической мембраной); Диаметр 20 нм |
Сложные, с расположением микротрубочек типа «9 + 2»; окружены плазматической мембраной; Диаметр 200 нм |
Дыхание |
У бактерий происходит в мезосомах; у цианобактерий – на цитоплазматических мембранах |
Аэробное дыхание происходит в митохондриях |
Фотосинтез |
Хлоропластов нет; происходит на мембранах, не имеющих специфической упаковки |
В хлоропластах, содержащих мембраны, которые обычно уложены в ламеллы или граны |
Фиксация азота |
Некоторые обладают такой способностью |
Ни один организм не способен к фиксации азота |