- •Федеральное агенство по образованИю
- •Оглавление
- •Биохимия простых белков
- •Лабораторная работа №1 Качественные цветные реакции на функциональные группы белков и аминокислот
- •Исследуемый материал и реактивы
- •Ход работы
- •Исследуемый материал и реактивы
- •Ход работы
- •Исследуемый материал и реактивы
- •Ход работы
- •Исследуемый материал и реактивы
- •Ход работы
- •Исследуемый материал и реактивы
- •Ход работы
- •Исследуемый материал и реактивы
- •Ход работы
- •Указания к оформлению лабораторной работы
- •Контрольные вопросы
- •Лабораторная работа №2 Реакции осаждения белков
- •Исследуемый материал и реактивы
- •Ход работы
- •Исследуемый материал и реактивы
- •Ход работы
- •Исследуемый материал и реактивы
- •Ход работы
- •Исследуемый материал и реактивы
- •Ход работы
- •Исследуемый материал и реактивы
- •Ход работы
- •Исследуемый материал и реактивы
- •Ход работы
- •Исследуемый материал и реактивы
- •Ход работы
- •Указания к оформлению лабораторной работы
- •Контрольные вопросы
- •Биохимия Сложных белков (протеинов)
- •Лабораторная работа №3 Геминовая проба Тейхмана
- •Исследуемый материал и реактивы
- •Ход работы
- •Указания к оформлению лабораторной работы
- •Контрольные вопросы
- •Лабораторная работа №4 Выделение казеиногена из молока и открытие в нем фосфата
- •Исследуемый материал и реактивы
- •Ход работы
- •Указания к оформлению лабораторной работы
- •Контрольные вопросы
- •Лабораторная работа №5 Выделение муцина из слюны и открытие в нем углеводного компонента
- •Исследуемый материал и реактивы
- •Ход работы
- •Указания к оформлению лабораторной работы
- •Контрольные вопросы
- •Биохимия ферменТов
- •Лабораторная работа №6 Количественное определение активности амилазы (по Вольгемуту)
- •Исследуемый материал и реактивы
- •Ход работы
- •Указания к оформлению лабораторной работы
- •Контрольные вопросы
- •Лабораторная работа №7 Специфичность действия амилазы слюны
- •Исследуемый материал и реактивы
- •Ход работы
- •Указания к оформлению лабораторной работы
- •Контрольные вопросы
- •Лабораторная работа №8 Влияние температуры на активность α-амилазы слюны
- •Исследуемый материал и реактивы
- •Ход работы
- •Указания к оформлению лабораторной работы
- •Контрольные вопросы
- •Лабораторная работа №9 Определение оптимума рН для действия α-амилазы слюны
- •Исследуемый материал и реактивы
- •Ход работы
- •Указания к оформлению лабораторной работы
- •Контрольные вопросы
- •Лабораторная работа №10 Влияние активаторов и ингибиторов на активность α-амилазы слюны
- •Биохимия нуклеиновых кислот
- •Лабораторная работа №11 Кислотный гидролиз нуклеопротеинов дрожжей и определение состава нуклеиновых кислот
- •Исследуемый материал и реактивы
- •Ход работы
- •Указания к оформлению лабораторной работы
- •Контрольные вопросы
- •Изучение реакций окисления
- •Лабораторная работа №12 Открытие альдегиддегидрогеназы в молоке
- •Исследуемый материал и реактивы
- •Ход работы
- •Указания к оформлению лабораторной работы
- •Контрольные вопросы
- •Лабораторная работа №13 Обнаружение каталазы крови
- •Исследуемый материал и реактивы
- •Ход работы
- •Указания к оформлению лабораторной работы
- •Контрольные вопросы
- •Лабораторная работа №14 Открытие пероксидазы
- •Лабораторная работа №15 Получение тирозиназы и окисление тирозина в присутствии кислорода
- •Исследуемый материал и реактивы
- •Ход работы
- •Указания к оформлению лабораторной работы
- •Контрольные вопросы
- •Обмен углеводов
- •Лабораторная работа №16 Определение глюкозы в крови (набором реактивов «Глюкоза-фкд»)
- •Исследуемый материал и реактивы
- •Ход работы
- •Указания к оформлению лабораторной работы
- •Контрольные вопросы
- •Биохимия липидов
- •Лабораторная работа №17 Эмульгирование триацилглицеридов желчными кислотами
- •Лабораторная работа №18 Качественная реакция Петтенкоффера на желчные кислоты
- •Исследуемый материал и реактивы
- •Ход работы
- •Указания к оформлению лабораторной работы
- •Контрольные вопросы
- •Лабораторная работа №19 Определение содержания β-липопротеинов (липопротеинов низкой плотности) в плазме крови
- •Исследуемый материал и реактивы
- •Ход работы
- •Указания к оформлению лабораторной работы
- •Контрольные вопросы
- •Лабораторная работа №20 Качественные реакции на холестерол
- •Исследуемый материал и реактивы
- •Ход работы
- •Биохимия белков
- •Лабораторная работа №21 Качественный анализ желудочного сока
- •Исследуемый материал и реактивы
- •Ход работы
- •Исследуемый материал и реактивы
- •Ход работы
- •Указания к оформлению лабораторной работы
- •Контрольные вопросы
- •Лабораторная работа №22 Определение активности аспартатаминотрансферазы( аланинаминотрансферазы) по методу Райтмана-Френкеля(набором реагентов)
- •Исследуемый материал и реактивы
- •Ход работы
- •Построение калибровочного графика
- •Указания к оформлению лабораторной работы
- •Контрольные вопросы
- •Лабораторная работа №23 Определение мочевины в крови по реакции с диацетилмонооксимом (набором реагентов)
- •Исследуемый материал и реактивы
- •Ход работы
- •Указания к оформлению лабораторной работы
- •Контрольные вопросы
- •Биохимия гормонов
- •Лабораторная работа №24 Качественная реакция на адреналин
- •Лабораторная работа №25 Обнаружение йодтиронинов
- •Витамины
- •Лабораторная работа №27 Качественные реакции на витамины Жирорастворимые витамины
- •Исследуемый материал и реактивы
- •Ход работы
- •Исследуемый материал и реактивы
- •Ход работы
- •Исследуемый материал и реактивы
- •Ход работы
- •Исследуемый материал и реактивы
- •Ход работы
- •Водорастворимые витамины
- •Исследуемый материал и реактивы
- •Ход работы
- •Исследуемый материал и реактивы
- •Ход работы
- •Исследуемый материал и реактивы
- •Ход работы
- •Исследуемый материал и реактивы
- •Ход работы
- •Исследуемый материал и реактивы
- •Ход работы
- •Исследуемый материал и реактивы
- •Ход работы
- •Исследуемый материал и реактивы
- •Ход работы
- •Биохимия печени
- •Лабораторная работа №27 Качественное определение «прямого» и «непрямого» билирубина в сыворотке крови
- •Исследуемый материал и реактивы
- •Ход работы
- •Указания к оформлению лабораторной работы
- •Контрольные вопросы
- •Лабораторная работа №28 Количественное определение содержания билирубина и его фракций в сыворотке крови
- •Исследуемый материал и реактивы
- •Ход работы
- •Калибровочный график для определения билирубина крови
- •Указания к оформлению лабораторной работы
- •Контрольные вопросы
- •Лабораторная работа №29 Тимоловая проба (проба коллоидоустойчивости)
- •Исследуемый материал и реактивы
- •Ход работы
- •Построение калибровочной кривой
- •Указания к оформлению лабораторной работы
- •Контрольные вопросы
- •Биохимия крови
- •Лабораторная работа №30 Определение общего белка в сыворотке крови биуретовым методом (набором реагентов)
- •Исследуемый материал и реактивы
- •Ход работы
- •Построение калибровочного графика.
- •Указания к оформлению лабораторной работы
- •Контрольные вопросы
- •Биохимия мочи
- •Лабораторная работа №31 Патологические компоненты мочи Качественные реакции на белок в моче
- •Исследуемый материал и реактивы
- •Ход работы
- •Исследуемый материал и реактивы
- •Ход работы
- •Исследуемый материал и реактивы
- •Ход работы
- •Определение глюкозы в моче
- •Исследуемый материал и реактивы
- •Ход работы
- •Качественные реакции на кровяные пигменты в моче
- •Исследуемый материал и реактивы
- •Ход работы
- •Исследуемый материал и реактивы
- •Ход работы
- •Качественная реакция на желчные пигменты в моче
- •Исследуемый материал и реактивы
- •Ход работы
- •Качественные реакции на ацетон и ацетоуксусную кислоту в моче
- •Исследуемый материал и реактивы
- •Ход работы
- •Исследуемый материал и реактивы
- •Ход работы
- •Исследуемый материал и реактивы
- •Ход работы
- •Исследуемый материал и реактивы
- •Ход работы
- •Качественная реакция на индикан в моче
- •Исследуемый материал и реактивы
- •Ход работы
- •Указания к оформлению лабораторной работы
- •Контрольные вопросы
- •Приложение Техника безопасности при работе в биохимических лабораториях
- •Способы взятия крови
- •Множители и приставки, применяемые для обозначений кратных и дольных единиц
- •Фотоколориметрия
- •Построение калибровочных кривых.
- •Подготовка фотоколориметра к работе.
- •Измерение коэффициента пропускания.
- •Разделение белков сыворотки методом электрофореза на бумаге
- •Исследуемый материал и реактивы
- •Ход работы
- •1. Электрофоретическое разделение белков сыворотки крови.
- •2. Окраска электрофореграмм.
- •3. Количественная оценка электрофореграмм.
- •Метод сахарной нагрузки
- •Исследуемый материал и реактивы
- •Ход работы
- •Анализ гликемических кривых
- •Kлинико-диагностическое значение оценки гликемических кривых
- •Количественное определение кислотности желудочного сока
- •Исследуемый материал и реактивы
- •Ход работы
- •Экспресс-методы обнаружения патологических компонентов мочи с помощью комбинированных тест-полосок
- •Xод работы
Лабораторная работа №4 Выделение казеиногена из молока и открытие в нем фосфата
Казеиноген белок молока относятся к сложным белкам – фосфопротеинам – содержит в качестве небелковой группы остатки фосфорной кислоты (0,5-0,9%).
К фосфопротеинам относятся также вителлин, вителлинин и витин яичного желтка, ихтулин рыбьей икры, а также ферменты – фосфорилаза, фосфоглюкомутаза, пепсин и др. Все фосфопротеины с химической точки зрения характеризуются эфирной связью фосфорной кислоты в белковых молекулах. Эфирная связь в молекулах фосфопротеинов осуществляется благодаря присоединению остатков фосфорной кислоты к оксигруппе остатков серина и треонина (оксиаминокислот). Биологическая роль фосфопротеинов заключается в том, что они служат типичным материалом для растущих организмов.
Присутствие фосфопротеинов в материале можно открыть реакциями на фосфаты, на белки и продукты их постепенного гидролиза. Казеиноген – фосфопротеин молока – под действием пищеварительных ферментов (пепсин) превращается в казеин, который с солями кальция образует казеинат кальция, что сопровождается свертыванием молока.
Кальциевая соль казеина в противоположность кальциевой соли казеиногена нерастворима в воде. Превращением казеиногена в казеин объясняется ферментативное свертывание молока. В простокваше и других кисло-молочных продуктах в свернутом состоянии находится казеиноген. Качественные реакции на фосфатную группу используются для открытия фосфопротеинов в исследуемых образцах.
Принцип метода. Казеиноген обладает свойствами кислоты и в молоке находится в виде анионов, растворимых в воде. Недиссоциированные молекулы казеиногена малорастворимы в воде. Изоэлектическая точка казеиногена находиться при рН=4,7. Этим объясняется, что при подкислении при рН=4,7 молоко свертывается благодаря выпадению в осадок казеиногена. Свертывание молока возможно также и в присутствии молочной кислоты, образовавшейся из лактозы под влиянием молочнокислых бактерий.
При щелочном гидролизе казеиноген (казеин) распадается на фосфат и белок. Фосфат может быть обнаружен специфической реакцией с молибденовым реактивом.
Исследуемый материал и реактивы
1. Молоко. 2. Уксусная кислота концентрированная. 3. Сернокислая медь (1%). 4. Едкий натр (10%). 5. Реактив Милона. 6. Реактив Фоля. 7. Фильтры. 8. Раствор гидроксида натрия (10%). 9. Биуретовый реактив. 10. Азотная кислота (концентрированная). 12. Раствор молибдата аммония. 13. Раствор аскорбиновой кислоты (1%) на 1М растворе соляной кислоты. 14. Лакмусовая бумага.
Ход работы
Выделение казеиногена из молока.
К 2 мл молока приливают равный объем дистиллированной воды. Осаждают казеиноген добавлением 1 капли концентрированной уксусной кислоты. Не следует добавлять избыток кислоты, поскольку молекулы белка казеиногена перезаряжаются и вновь переходят в раствор, что мешает осаждению. Выпавший осадок казеиногена отфильтровывают и промывают на фильтре дистиллированной водой 2 раза. Часть осадка снимают с фильтра стеклянной палочкой и проводят с ним цветные реакции на белки (биуретовую, Фоля, Милона).
Обнаружение фосфата в казеиногене.
В пробирку вносят 0,1г сухого порошка казеина, прибавляют 5 мл 10% раствора гидроксида натрия и ставят в кипящую водяную баню на 30 мин. Охлаждают пробирку и проводят реакцию на продукты гидролиза.
А. Обнаружение белка. Проводят реакцию 10 капель гидролизата и проводят реакцию с биуретовым реактивом, добавляя 3-5 капель его к 10 каплям гидролизата (см. лаб. № 2). Отмечают появление характерного окрашивания.
Б. Обнаружение фосфата. В другую пробирку вносят 20 капель гидролизата и нейтрализуют его, прибавляя по каплям концентрированную азотную кислоту до слабокислой реакции по лакмусовой бумаге. Затем прибавляют 10 капель раствора молибдата аммония, перемешивают содержимое и приливают 10 капель 1% раствора аскорбиновой кислоты, приготовленной на 1М растворе соляной кислоты. Вновь перемешивают, оставляют стоять пробы до развития синего окрашивания и записывают химизм реакции.
Н3РО4+12(NH4)2МоО4+21НNО3→(NН3)3(РО4•12МоО3)+21N4NО3+12Н2О