Реовирусы: сборка и выход потомства из клетки.

• Механизм, ответственный за распределение различных сегментов генома между дочерними частицами неизвестен

• Частицы собираются в цитоплазме через 6-7 часов после начала инфекции ( тельца включения). Выход из клетки

• Выход частиц из эндоплазматического ретикулума в цитоплазму клетки

• Накопление

• Лизис клетки

В цитоплазме синтезируются белки, у реовирусов одни и те же белки как структурные, так и ферментативную функцию выполняют. Эти белки образуют некую частицу вокруг +РНК, эта частица обладает транскрипционной активностью, в результате внутри частицы делаются минус цепи и у нас внутри двуцепочечный геном. Дальше частица может обстраиваться структурными белками и может формироваться вирион. Но у многих вирусов(у Ротавирусов, например) белков не хватает для формирования зрелых вирионов и тогда начинается вторичная транскрипция в дочерних частицах и появляется второе поколение мРНК и частиц и тд.

Еще раз о белках:

Внутренний капсид сложен лямбда-1, лямбда-3 , мю-2 и сигма-2.

Канал диаметром 8 нм образован лямбда 2.

Лямбда 2 - метил и гуанидилтрансфераза, она кэпирует транскрипты, которые выходят из вирусной коровой частицы, и строит каналы, через которые они выходят.

Лямбда-3- это транскриптаза, лямбда-1 - хеликаза. Все вместе-

транскрипционный комплекс. Белок сигма-1, помимо пробки, обладает

гемаагглютинирующей активностью, это основной антиген, и он

отвечает за взаимодействие с клеткой.

Организация генома ретровирусов

10 Двуцепочечных сегментов обозначены заглавными латинскими буквами l, m, s. С l1 образуется лямбда-3. С l2 - лямбда-2. С l3-лямбда-1.

С M1 - мю2(структурный белок и фермент НТФаза), с М2-мю1(белок внешнего капсида, участвует в проникновении через мембрану), с М3-мю-NS+(помогает взаимодействию дочерних двуцепочечных РНК с кором) и

мю-NSC(ф-ции неизвестны). Их два, поскольку старт мю- NSC не в

рамке и делается с некоторой частотой, получаются в результате альтернативного сплайсинга с одной матрицы,видимо, как-то ингибируют ответ клетки, связываются с дц-днк и ингибируют появление интерферона.

мРНК- два белка сигма-1(пробка) и сигма-1S(функции неизвестны, возможно вместе с сигма-2 участвует в сборке и созревании вириона) сигма-NS отвечает за внутрикл. локализацию кора. Сигма-3 - структурный белок внешнего капсида.

Сигма 1 взаимодействует с рецептором---эндосома---

протеолиз---выход кора в цитоплазму---траснкрипция внутри кора (первичная транскрипция)---

трансляция--- инкапсидирование кэпированых +РНК-синтез вторых

цепей --- созревание--- зрелые вирионы.

У ротавирусов немного другая схема - есть первичная транскрипция и трансляция в дочерних частицах, так как не хватает белков для созревания. Вторичная транскрипция: дочерние вир. частицы становятся поставщиками новых матричных рнк. Выход у всех литический. Дочерние, частицы в составе одной вирусной частицы- 12 разных фрагментов

(Сколько их в итоге? 10, 9 или 12?). При этом неясно, как они

пакуются, но собирается он четко (все образующиеся вирионы инфекционны!!!). 6-7 часов инфекционный цикл.

Ретровирусы

РНК-cодержащие вирусы, которые синтезируют ДНК на матрице РНК.

Ретровирусы (сем. Retroviridae), ss (+) RNA, при этом в каждую частицу входят 2 молекулы одноцепочечной рнк (единственный пример диплоидного генома); окружены липопротеидной оболочкой.

• В жизненном цикле присутствует стадия транскрипции ДНК на матрице геномной вирусной РНК с помощью вирусного фермента обратной транскриптазы (ревертазы).

• Большое уникальное семейство, включающее вирусы, вызывающие онкологические заболевания, заболевания, поражающие иммунную систему и связанные с дегенеративными и неврологическими синдромами.

• Группа VI (по Балтимору)

Независимо от хозяина (человек, насекомые, млекопитающие и др) ретровирусы очень схожи по структуре генома и способу репликации.

Типичный представитель – вирус саркомы Рауса (SRV).

Общая схема: с +РНК с помощью обратной транскрипции образуется

одноцепочечная ДНК, на ней - двуцепочечная ДНК (с помощью того же фермента), дальше - интеграция в клеточный геном (эта двухцепочечная копия есть провирус), в составе клеточного генома идет транскрипция с помощью клеточного фермента, образуются +РНК, структурные белки- сборка и выход.

Выщепления генома вируса из клеточного генома не происходит,

клетку не вылечить.

Активности ревертазы смотри на картинке выше. РНКаза Н – это удаление РНК из дуплекса РНК – ДНК. Интеграза позволяет ДНК-копии вирусного генома встраиваться в клеточную ДНК. В зависимости от рода все эти функции могут выполняться несколькими белками, а м б одним – двумя, интеграза, например, может быть вместе с другими активностями, а м б на отдельном белке.

Структура вириона

Оболочечный вирус, сферический, диаметром около 100 нм.

Поверхностный гликопротеид построен из 2х типов молекул:

1. Трансмембранный белок ТМ

2. Гликопротеид SU – несет функции адсорбции, необходим для взаимодействия вируса с клеткой.

Матриксный белок (МА)

Капсидный белок (СА). Внутри капсида есть две молекулы мРНК

(вирус-то диплоидный) одетых NC(нуклеокапсидным) белком.

Геном ретровирусов

Молекулы рнк кэпированы и полиаденилированы, однако не являются матрицами в синтезе белка. 2 мол-лы РНК сильно сближены и практически взаимодействуют на уровне водородных связей.

Мол-лы РНК в районе 5 концов сближены на расст около несколько сот нуклеотидов. Близко к этому же концу обе молекулы связаны с клеточными тРНК, которые несут ф-ции затравок при образовании ДНК на РНК. Вид РНК зависит от вида ретровируса. Для вируса саркомы Рауса это триптофановая РНК.

Участок связывания с тРНК называют PBS – участок (primer binding site), его длина – 18 нуклеотидов, играет важную роль в репликации.