3.1.5 Количественное определение суммы флавоноидов в настойке травы пустырника

Ход работы. В мерную колбу вместимостью 25,0 мл помещали 2,0 мл настойки, добавляли 2,0 мл 1 % раствора алюминия хлорида в 95 % этиловом спирте и доводили объем раствора 95 % этиловым спиртом до метки. Для приготовления раствора сравнения в другую колбу вместимостью 25,0 мл помещали 2,0 мл настойки и доводили до метки 95 % этиловым спиртом. Измерение оптической плотности проводили через 40 мин на спектрофотометре при дине волны 410 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм. Параллельно измерили оптическую плотность раствора ГСО рутина. Суммарное содержание флавоноидов в сухом сырье в пересчете на стандарт и абсолютно сухое сырье вычисляли по формуле 3.1 [3].

3.1.6 Определение сухого остатка в настойках травы пустырника

Принцип работы. Метод основан на взвешивании высушенного при температуре 105 ± 2 ºС остатка, полученного при выпаривании аликвотной части отфильтрованной пробы исследуемого образца.

Ход работы. В выпарную чашу диаметром около 50 мм и высотой около 30 мм вносили 2,0 мл настойки и взвешивали. Выпаривали досуха на водяной бане и сушили при температуре 100-105 ºС до постоянной массы. Охлаждали в эксикаторе над силикагелем безводным Р и взвешивали. Количество сухого остатка ( , г) вычисляли по формуле:

где – масса сухого остатка в 1 л экстракта, г/л;

– масса выпарной чаши с экстрактом до выпаривания, г;

– масса выпарной чаши с экстрактом после высушивания, г;

2 – объем пробы, мл;

1000 – коэффициент перевода мл в л [31].

Все исследования проводили в трехкратной последовательности.

3.1.6 Исследование флавоноидов методом гель-хроматографии

Принцип метода. В колонку вносят образец, объем которого является лимитирующим для качества хроматографии. Для аналитических разделений он не должен превышать 0,1 % от общего объема колонки, а для препаративной очистки он должен быть не выше 8-10 % от общего объема колонки. Колонка упакована порошком, частицы или гранулы которого имеют поры определенного диаметра. Высокомолекулярные вещества, не входящие в поры, проходят между гранулами, поэтому их объем удержания равен объему колонки за вычетом объема стационарной фазы (так называемый, свободный объем). Они элюируются первыми. Молекулы средних размеров помещаются в поры сорбента, но не полностью. Поэтому их объем удержания несколько выше свободного объема. Они элюируется вторыми. Самые мелкие молекулы свободно входят в поры вместе с молекулами растворителя. Поэтому их объем удержания в колонке намного выше свободного и приближается к общему объему колонки. Они элюируются последними (рисунок 3.2) [32].

а – момент внесения смеси на колонку; б – начало фракционирования; в – начало выхода из колонки фракции наиболее крупных молекул; г – конец выхода фракции мелких молекул

Рисунок 3.2 – Принцип гель-хроматографии (кружки – гранулы пористой матрицы; черные точки размеров – компоненты смеси веществ)

Ход работы. В 150,0 мл 30 % этилового спирта настаивали гель Акрилекс П-10 (Reanal, Венгрия) до образования гелеобразной массы. После чего заполняли хроматографическую колонку. В качестве неподвижной фазы выступал 47 % этиловый спирт. Настойку пустырника центрифугировали на центрифуге (МРW-310, Польша) 10 мин при 5600×g. На колонку 31,5×7 см вносили 1,0 мл супернатанта и элюировали уравновешивающим раствором со скоростью 38,5 мл/(см²·мин). Фракции собирали в коллекторе FRACTION COLLECTOR FCC 61 (Чехословакия) и измеряли их экстинкцию при 340 нм на спектрофотометре SPEKOL 1300 (). Строили графики зависимости E₃₄₀ от объема элюента.