7. Реакция торможения гемагглютинации (ртга).

Рис. 8. Реакция торможения гемагглютинации (РТГА) (схема).

Принцип реакции основан на способности АТ связывать различные вирусы и нейтрализовать их, лишая возможности агглютинировать эритроциты. Визуально этот эффект и проявляется в «торможении» гемагглютинации. РТГА применяют при диагностике вирусных инфекций для выявления специфических антигемагглютининов и идентификации различных вирусов по их гемагглютининам, проявляющим свойства Аг.

Типирование вируса проводят в реакции РТГА с набором типоспецифических сывороток. Результаты реакции учитывают по отсутствию гемагглютинации. Подтипы вируса типа А с антигенами H0N1, H1N1, H2N2, H3N2 и другие могут быть дифференцированы в РТГА с набором гомологичных типоспецифических сывороток

Рис. 9. Результаты РТГА при типировании вируса гриппа

Условные обозначения: - торможение гемагглютинации (пуговка) ; - гемагглютинация (зонтик).

Выводы:     Исследуемый  материал содержит вирус гриппа тип А с антигеном H3N2

Определение титра антител крови больного по РТГА

         Развернутая РТГА проводится в лунках пластмассовых пластин. В лунках готовят 2-х кратные разведения исследуемой сыворотки в объеме 0,25 мл, добавляют по 0,25 взвеси вируса в рабочем разведении и инкубируют 2 ч при температуре 37°С. Затем добавляют по 0,5 мл 1% взвеси куриных эритроцитов, инкубируют еще 2 ч  и оценивают результат по феномену гемагглютинации. При положительной РТГА образуется плотный осадок эритроцитов на дне лунки в виде диска или кольца с ровными краями. Титр антител определяют по последней лунке с положительной РТГА.

Рис. 10. Определение титра антител по РТГА.

Выводы: титр антител равен 1:40.

8. Результаты реакции нейтрализации выделенных от больных    вирусов с моновалентными иммунными сыворотками к вирусам полиомиелита I-III типов.

Выделение энтеровирусов из исследуемого материала осуществляют путем заражения клеточных культур. Индикацию вирусов проводят по цитопатогеному действию (ЦПД): на 2-3-й день инкубации при 35°С наблюдается полная или частичная дегенерация клеток.  Основным методом идентификации выделенного вируса является серотипирование в реакции нейтрализации. С этой целью материал из чистой культуры выделенного вируса обрабатывают смесью диагностических моновалентных сывороток к различным серотипам энтеровирусов. При этом в начале определяют тип вируса, затем его принадлежность к определенному серотипу.

Рис. 11. Реакция нейтрализации вирусов в культуре клеток: А - цитопатогенный эффект (ЦПЭ) или цитопатогенное действие (ЦПД) в результате размножения вирусов; Б - ЦПЭ отсутствует в результате предварительной нейтрализации вирусов антителами.

Рис. 12. Постановка и учет реакции нейтрализации вирусов в культкре клеток. Условные обозначения:   + -  ЦПД;  – -  отсутствие  ЦПД.

Выводы:  В исследуемом материале определен вирус полиомиелита  серотип  I.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ  ГРУПП  КРОВИ  АВО

9. Реакция гемагглютинации (рга)

Аг (эритроциты крови) + АТ (стандартная сыворотка) + электролит = гемагглютинат

На плоскость (тарелку, планшет) наносят глазной пипеткой, индивидуальной для каждой ампулы, по 2 кап. (0,1 мл) стандартной сыворотки двух различных серий каждой группы слева направо: Оab(I), Аb(II), Вa(III). Итого 6 капель на расстоянии 3-4 см друг от друга. Рядом со стандартными сыворотками наносят по 1 кап. исследуемой крови величиной с булавочную головку - 0,01 мл 20% взвеси исследуемых эритроцитов. Встряхиванием перемешивают сыворотку с кровью, периодически покачивают и смотрят результат через 5 минут. В те капли, где наступила агглютинация, вносят по 1 кап. физиологического раствора.

         Оценка результатов

• Нет агглютинации во всех сыворотках               - это Оab(I) группа крови

• Агглютинация в сыворотках Оab(I) и Вa(III)      - это Аb(II) группа крови

• Агглютинация в сыворотках Оab(I) и Аb(II)       - это Вa(III) группа крови

• Агглютинация во всех сыворотках                      - это АВ0(IV) группа крови

      

Рис. 13. Результат РГА при определении группы крови АВО: а) - отрицательная РГА (нет гемагглютинации); б) - положительная РГА (гемагглютинация).

   Если сыворотки всех трех групп дали положительную реакцию, то для исключения неспецифической агглютинации необходимо провести дополнительное контрольное исследование со стандартной сывороткой АВ0(IV) группы. Для этого на плоскость наносят большую (0,1 мл) каплю сыворотки АВ0(IV) и к ней добавляют маленькую (0,01 мл) каплю исследуемой крови и смотрят результат через 5 минут. Лишь отсутствие агглютинации в этой капле при наличии ее в каплях со стандартными сыворотками групп Оab(I), Аb(II) и Вa(III) позволяет считать реакцию специфической и отнести исследуемую кровь к группе АВ0(IV).