Замораживание спермы в необлицованных гранулах

Замораживание спермы быка в виде необлицованных гранул на фторопластовой пластине. Порядок работы: используется искусственная среда как при первой технологии (ЛГЦЖ), разбавление осуществляется сразу до нужной концентрации, эквилибрация осуществляется в стеклянном сосуде в течение 3-4 часов при температуре +2-+4 ̊С. С помощью специальной установки сперма фасуется в лунки фторопластовой пластины (либо стерильным шприцом с длинной иглой). Объем гранул 0,5 мл или 0,2 мл. Сначала пластина охлаждается в парах жидкого азота, затем погружается в толщу жидкого азота, затем приподнимается, разливается сперма, замораживается (опускают обратно в жидкий азот на 3-4 минуты), поднимается, гранулы собираются в подписанные полиэтиленовые мешочки.

Замораживание спермы в облицованных гранулах

Замораживание спермы быка в виде облицованных гранул. Для разбавления спермы используются два устройства, которые заполняются средой №1 и средой №2. Среда №1 включает 11% раствор сахарозы или лактозы, глицерин, желток куриного яйца, используется при температуре +35 ̊С. Среда №2 – бидистиллированная вода, глицерин, трехзамещенный пятиводный лимоннокислый натрий (цитрат натрия), сахароза или лактоза; используется при комнатной температуре (+20-+24 ̊С). После получения спермы измеряется объем, концентрация, активность. По специальной таблице определяют объем разбавления. Сначала разбавляют 1:1 средой № 1, выдерживают 50 минут при комнатной температуре, затем дополнительно полученный эякулят разбавляют средой №2 до нужной концентрации (15 млн. половых клеток). Фасовка разбавленной спермы в стерильную тонкостенную полимерную трубу диаметром 3,8-4 мм осуществляется через спермоприемник, где были выполнены разбавления. Спермоприемник подсоединяют концу трубки, давят на стенки, по трубке разбавленная сперма выходит в прибор ПРЖ, который протаскивает трубку, производит отсечение гранул (0,25-0,33мл) путем спайки двух поверхностей. В последующем полученные таким способом гранулы собираются в специальный контейнер, который подписывается (предприятия, бык, номер, дата). Затем осуществляется эквилибрация при температуре +2-+5 градусов в течение 4-6 часов и при постоянном вращении барабана с контейнерами (2-10 оборотов в минуту). После эквилибрации сперму замораживают в жидком азоте в течение 8-10 минут. Из этого контейнера сперму забирают в специально подготовленные марлевые мешочки.

Замораживание спермы в соломинках

Замораживание спермы быка в полипропиленовых соломинках (пайетах). Технология была разработана в 1975 году во Франции ученым Л. Кассу. Соломинки объемом 0,5 мл, диаметр 3мм. Для разбавления спермы быка в настоящее время используют среду ЛГЦЖ (лактозо-глицерино-цитратно-желточная среда). В зависимости от активности и концентрации полученной спермы её разбавляют от 20 до 50 раз, с таким расчетом, чтобы в 1 дозе было не менее 15 млн. половых клеток. После предварительной оценки сперму переливают в смеситель с емкостью 100-200мл и измеряют объем, разбавитель при температуре +25-30ёС небольшими порциями приливают по стеночке, перемешивают. В последующем, прежде чем приступить к фасовке, заполнению соломинок. Прежде чем в специальной машине под действием вакуума происходит заполнение соломинок, концентрация половых клеток должна быть равномерной (магнитные мешалки). Машина маркирует соломинки: название предприятия, кличка быка, инвентарный номер, дата получения спермы, номер серии. Чтобы сперма не вытекла: 1) укупоривание концов с помощью стеклянных шариков; 2) укупоривание с одной стороны пробкой из нетоксического для спермиев волокна, с другой стороны склеивают. После наполнения соломинок между спермой и одним из шариков или пробкой остается воздушный пузырек. Чтобы воспрепятствовать попаданию жидкого азота внутрь соломинок, пузырек перемещают в середину соломинки путем энергичного встряхивания. После чего пайету помещают в штатив и ставят в холодильник при температуре 2-4 ̊С на 3-4 часа. Прием называется «эквилибрация». Замораживают сперму по этой технологии на специальном железном щите в стационарном хранилище в газообразном азоте при температуре -150 ̊С, время – 7 минут. Пайеты выпускаются объемом 0,33 мл и 0,25 мл. Одновременно замораживают до 750 соломинок. После замораживания пайеты со спермой перемещают в пластмассовые стаканы, предварительно наполненные жидким азотом. Для сбора соломинок используют специальный собиратель с деревянной ручкой. Хранят замороженную сперму в стационарных хранилищах в пластмассовых стаканах, полностью погруженных в жидкий азот.