2 Материалы и методы

Объектом исследования служили две неизвестные культуры под кодами 18-19 и 77-32.

При исследовании использовались среда следующего состава: рыбный агар(50%), и сусло 3⁰Б(50%).

Культивирование в чашках проводили в периодическом режиме в термостате при Т=30 ⁰С в течение 7 суток.

Выделенными чистыми культурами засевали в пробирки со скошенной агаризованной средой.

Культивирование проводили в периодическом режиме на качалке в термостате при Т=30 ⁰С в течение 7 суток.Провели анализ культуральных и морфологических свойств культур, посредством описания роста колоний с чашек Петри, описания роста микроорганизмов по штриху и микроскопирования ( таб. 2).

2.1 Методы идентификации микроорганизмов

Были использованы шаблонные методы, представленные в сборниках [1,2], а также оригинальные методики, описанные в статьях [3,4,5,6,7].

2.1.1 Определение физиологических признаков

Для идентификации выделенной бактериальной культуры необходимо определить продуцирует ли она фермент каталазу. 1. Каталаза, продуцируемая бактериями, будет разлагать перекись водорода на воду и кислород, выделение которого в виде пузырьков и регистрируется. 2. Если каталазной активности у бактериальной культуры нет, пузырьков не будет. Данные анализа приведены в таблице 2.

Определение окраски по Грамму [2].Техника окраски. Фиксированный препарат окрашивают карболовым раствором генциан фиолетового. Через 1—2 мин. краску сливают и наливают раствор Люголя (на 1 мин.) до почернения. Слив раствор Люголя, помещают препарат в 96° спирт на 20—30 сек., чтобы исключить излишнее обесцвечивание клеток, к спирту добавляют йод(2 мл 10%-ного спиртового растврора иода на 100 мл этанола) после чего спирт смывают водой. Препарат докрашивают разведенным фуксином в течение 30—60 сек. Затем препарат промывают водой, высушивают и микроскопируют. Грамположительные микроорганизмы имеют темно-фиолетовый цвет, а грамотрицательные — красный. (таб.2 ).

Определение кислотоустойчивости микроорганизмов. [2]. Фиксированный мазок покрывают плоской фильтровальной бумагой и наливают на неё карболовый фуксин Циля. Мазок подогревают над пламенем горелки до появления паров, затем отводят для охлаждения и добавляют новую порцию красителя. Подогревание повторяют 2—3 раза. После охлаждения снимают фильтровальную бумагу и промывают препарат водой.

2. Препарат обесцвечивают путем погружения или нанесения на него 25%-го раствора серной кислоты или 3 % солянокислого спирта в течение 3-х минут, и промывают несколько раз водой.

3. Окрашивают препараты водно-спиртовым раствором метиленового синего 1 минуту, промывают водой и высушивают.

При окраске по методу Циля — Нельсена кислотоустойчивые бактерии приобретают интенсивно красный цвет, остальная микрофлора окрашивается в светло-синий цвет. (таб 2)

Отношение к кислороду. Чтобы судить о принадлежности микроорганизмов к той или иной группе, микроорганизмы сеют уколом в пробирки с плотной питательной средой. Т.к. в результате анализа было обнаружно, что обе культуры растут на поверхности, можно сделать вывод о принадлежности их в строгим аэробам. (таб. 2) (рис. 1)

Протеолиз желатины. Микроорганизм высевают на гидролизате рыбной муки. К 100 мл гидролизате рыбной муки добавляют 10—15 г желатины, оставляют на 20- 30 мин, чтобы желатина набухла, затем смесь нагревают на водяной бане до полного растворения желатины и разливают полученную среду в пробирки по 8—10 мл. Стерилизуют при 0,5 ати 15 мин. Посев проводят уколом. Продолжительность культивирования 7—10 суток при комнатной температуре. Разжижение желатины или его отсутствие отмечают визуально. Если желатина разжижается, указывают интенсивность и форму разжижения — послойное, воронкообразное, мешковидное, пузыревидное и т. д. (таб 2)

Протеолиз казеина. Для выявления этой способности используют молочный агар — среду, состоящую из равных частей стерильного обезжиренного молока и стерильного 3%-ного водного агара. Как правило, перед приготовлением среды молоко обезжиривают центрифугированием в течение 15 мин при 2—3 тыс. об/мин. Жиры, которые образуют на поверхности молока достаточно плотную пленку, удаляют, а молоко стерилизуют при 0,5 ати. После стерилизации его подогревают и добавляют при постоянном перемешивании к стерильному расплавленному и остуженному до 50° водному агару. Полученную среду разливают в чашки Петри. Микроорганизмы высевают штрихом по диаметру чашки или уколом. Продолжительность культивирования 2—10 суток. Гидролиз казеина обнаруживают по зоне просветления среды вокруг колонии или выросших по штриху микроорганизмов. Особенно четко она видна после обработки среды раствором 5%-ной трихлоруксусной кислоты. Зону гидролиза казеина измеряют в мм от края штриха или колонии до границы светлой зоны. Чем больше диаметр светлой зоны, тем выше казеинолитическая активность бактерий. (таб 2)