- •(Экспериментальное исследование)
- •Список сокращений и аббревиатур, использованных в работе
- •Глава 1. Перспективы применения ксеногенной ткани селезенки для коррекции постспленэктомических нарушений (обзор литературы) 10
- •Глава 2. Материалы и методы исследования 25
- •Глава 3. Получение криоконсервированных клеток селезенки свиньи для ксенотрансплантации 41
- •Глава 4. Морфофункциональная оценка эффективности ксенотрансплантации клеток селезенки как способа коррекции индуцированного гипоспленизма 55
- •Глава 5. Изменения гомеостаза в условиях постсплен-эктомического гипоспленизма, корригированного ксенотрансплантацией клеток селезенки 79
- •Введение
- •Глава 1. Перспективы применения ксеногенной ткани селезенки для коррекции постспленэктомических нарушений (обзор литературы)
- •Проблема постспленэктомического гипоспленизма
- •1.1.1. Клинико-лабораторные проявления синдрома постспленэктомического гипоспленизма
- •1.1.2. Способы профилактики и коррекции гипоспленических послеоперационных расстройств
- •Ксенотрансплантация свиных органов и тканей
- •1.3. Технология получения материала для ксенотрансплантации
- •Глава 2. Материалы и методы исследования
- •2.1 Общая характеристика экспериментального материала
- •2.2. Характеристика методов исследования
- •2.2.1. Техника оперативных вмешательств
- •2.2.1.1. Ложная операция
- •2.2.1.2. Спленэктомия
- •2.2.1.3. Экстраперитонеальная аутотрансплантация селезенки
- •2.2.1.4. Ксенотрансплантация клеток селезенки
- •2.2.2.Приготовление препаратов для ксенотрансплантации
- •2.2.2.1. Получение взвеси клеток селезенки
- •2.2.2.2. Приготовление питательной среды для инъекции
- •2.2.2.3 Ранотензиометрия
- •2.2.3. Методы лабораторного контроля
- •2.2.3.1.Определение биохимических показателей сыворотки крови
- •2.2.3.3. Исследование показателей системы гемостаза
- •2.2.3.4 Иммунологические методы исследований
- •2.2.3.5 Общеклиническое исследование крови
- •2.2.3.6 Бактериологические методы исследований
- •2.2.4. Методы морфологического исследования
- •2.3.Методы статистической обработки
- •Глава 3. Получение криоконсервированных клеток селезенки свиньи для ксенотрансплантации
- •3.1.Технология выделения клеток селезенки
- •3.1.1 Дезагрегация ткани селезенки
- •3.1.2. Оптимизация рН среды для культивации клеток
- •3.1.3 Культивирование клеток селезенки новорожденной свиньи
- •3.2.Консервация клеток
- •3.2.1. Приготовление среды для криоконсервации
- •3.3. Получение препарата и ксенотрансплантация
- •Глава 4. Морфофункциональная оценка эффективности ксенотрансплантации клеток селезенки как способа коррекции индуцированного гипоспленизма
- •4.1 Развитие постспленэктомического гипоспленизма в ходе эксперимента
- •4.2 Летальность в экспериментальных группах
- •4.2.1. Патоморфологическое исследование погибших животных
- •4.3. Морфологическая оценка эффектов трансплантации ткани селезенки в условиях гипоспленизма
- •4.3.1 Исследование структуры печени
- •4.3.2.Исследование структуры легких
- •4.4. Морфологическое исследование зон трансплантации
- •4.5. Результаты ранотензиометрических исследований
- •Глава 5. Изменения гомеостаза в условиях постсплен-эктомического гипоспленизма, корригированного ксенотрансплантацией клеток селезенки
- •5.1. Лабораторная оценка раннего гепатопротекторного эффекта ксенотрансплантации культуры клеток селезенки
- •5.2. Влияние ксенотрансплантации клеток селезенки на белково-синтетическую функцию печени в раннем послеоперационном периоде
- •5.3. Изменения неспецифической резистентности организма у аспленизизированных животных под воздействием ксенотрансплантации клеток селезенки в раннем послеоперационном периоде
- •5.4. Влияние ксенотрансплантации клеток селезенки на систему гемостаза в раннем периоде после индукции гипоспленизма
- •Заключение
- •Практические рекомендации
- •Список использованной литературы
Глава 1. Перспективы применения ксеногенной ткани селезенки для коррекции постспленэктомических нарушений (обзор литературы)
Углубленное изучение функций селезенки и ее значения для реализации гомеостаза привели к развитию представлений о синдроме постспленэктомического гипоспленизма – патологическом состоянии, сопутствующем аспленизации организма [11]. Проблема тем более актуальна, что СЭ остается пока операцией выбора при травме органа во многих, даже крупных, хирургических клиниках [57, 273].
Охарактеризуем СПГ и механизмы, лежащие в основе его развития.
Проблема постспленэктомического гипоспленизма
В отечественной литературе Р.М. Гланцем М.М. Рожинским описаны следующие проявления СПГ: качественные и количественные изменения в крови, свидетельствующие о нарушении процессов кроветворения, снижение жизненного тонуса, явления физиологического дискомфорта, повышенная чувствительность к инфекции [40].
1.1.1. Клинико-лабораторные проявления синдрома постспленэктомического гипоспленизма
Давно известно, что после СЭ наблюдаются тяжелые инфекции.[219,260].
Клиническими проявлениями СПГ в раннем послеоперационном периоде является повышенная восприимчивость к хирургической инфекции [168], проявляющаяся послеоперационными гнойно-воспалительными процессами [164,182,209,346], в т.ч. легочно-плевральными [43], а также возрастает риск тромбоэмболических осложнений [145,154,195,201, 205,295,330,338].
Это подтверждено в эксперименте на крысах, кроликах, собаках и свиньях на септической модели с применением бактерий, имеющих полисахаридную капсулу [166,204,294].
Проявлениями СПГ является существенное снижение опсонизации [165], фагоцитарной и бактерицидной активности клеток крови (нейтрофилов, естественных киллеров) [165,238] и системы фагоцитирующих мононуклеаров (в т.ч. альвеолярных макрофагов, клеток Купфера) [162,224,309,364], уменьшение уровня Ig (особенно Ig M) [59,75,95,182,199,226], концентрации TNFα [200,259,313,321], тафцина [262,282,364] и других цитокинов [37,165,171,227,234].
Изменяется соотношение Т- и В- лимфоцитов, а также их функциональная активность [55,163,236], нарушается первичный иммунный ответ [152,153,165,167,171,234].
У крыс защитная функция селезенки имеет очень важное значение, и удаление ее приводит к гибели животных [14,45]; кроме того, СЭ приводит к анемии различной степени выраженности [38,45].
В отдаленном послеоперационном периоде СПГ реализуется молниеносным сепсисом (особенно в течение 2 лет после операции) с летальностью, достигающей 50-90% [63,181,211,249,273,288,304,328,336], частыми респираторными инфекциями [249,364].
Бактериологическое исследование крови чаще выявляет Streptococcus pneumonie (около 50% наблюдений) [246,288], а также Neisseria meningidis, Esherichia coli [181,297], Haemophilus influenzae [150], Pseudomonas [188], менинго- и гонококки, т.е. микроорганизмы, обладающие полисахаридной капсулой, что препятствует их опсонизации [165,249,297,336].
Другими проявлениями СПГ являются снижение антибластической резистентности (например, СЭ снижает выживаемость после операций по поводу рака желудка) [146,162,224,309,357,364] и астенический синдром - повышенная утомляемость, лабильность психики, снижение интеллектуальных способностей - наиболее ярко выраженный после СЭ, выполненной в детском возрасте [40]. Значительно повышается содержание «рябых» эритроцитов в периферической крови, появляются тельца Хауэлла-Жолли [38,56,59,172,174], акантоциты, тельца Паппенгеймера [203].
В качестве характерных после СЭ описаны нарушения физиологии печени: дистрофические изменения и замедление митотической активности гепатоцитов (в т.ч. после резекции печени) [113,270], транзиторное снижение продукции протромбина, проконвертина и фактора V [38].
Наблюдается снижение детоксикационной, биотрансформационной и белковосинтетической функций печени [38,42,68].
Известны наблюдения фатальной острой печеночной недостаточности после СЭ, выполненной по гематологическим показаниям [242].
Другим патогномоничным проявлением СПГ считают ухудшение заживления послеоперационных ран, нарушение регенерации роговицы [18,235,347].
Названными обстоятельствами инициированы многочисленные экспериментально-клинические изыскания по профилактике и/или коррекции гипоспленических расстройств. Кратко остановимся на основных подходах к решению этой проблемы: