2 курс / Гистология / Описание_препаратов_к_лабораторным_работам_по_цитологии_и_гистологии

КАЛИНИНГРАДСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ

ОПИСАНИЕ ПРЕПАРАТОВ К ЛАБОРАТОРНЫМ РАБОТАМ

ПО ЦИТОЛОГИИ И ГИСТОЛОГИИ

ДЛЯ СТУДЕНТОВ БИОЛОГИЧЕСКОГО ФАКУЛЬТЕТА

Калининград

1996

Методическое пособие содержит описание препаратов, что позволяет студентам лучше их понять. Обязательная зарисовка препарата дает возможность выделить основные структуры, обратить внимание на детали, ускользающие от наблюдения, закрепить зрительное восприятие. Для выполнения лабораторных работ студенты должны иметь альбом или тетрадь, черный и цветные карандаши. При изучении описаний препаратов необходимо обратить внимание на выделенные курсивом термины. Обозначающие их структуры обязательно должны быть изображены на рисунках, а эти термины включены в подписи к рисункам.

Каждое лабораторное занятие рассчитано на два часа и проводится по следующему плану:

1.Определение уровня знаний по теме лабораторной работы (10 мин).

2.Изучение описаний к препаратам и выполнение рисунков (60 мин).

3.Анализ выполненной работы с указанием преподавателем возможных ошибок (15 мин).

4.Задание по теоретической подготовке к следующему занятию (5 мин).

ЦИТОЛОГИЯ

Занятие 1. Общая морфология животной клетки. Клеточные органоиды

Препарат 1. Печень аксолотля. Окраска: гематоксилин-эозин.

Среди позвоночных животных хвостатые амфибии имеют наиболее крупные клетки. Поэтому этот препарат является очень удобным объектом для знакомства с животной клеткой.

Печеночные клетки (гепатоциты) имеют на срезе вид многоугольников. Их цитоплазма окрашена в розовый цвет. Ядра клеток округлые, фиолетового цвета. Внутри ядер видны глыбки хроматина и два розовых ядрышка. Между печеночными клетками рассеяны пигментные клетки, цитоплазма которых заполнена гранулами бурого пигмента - меланина. В просвете капилляров можно увидеть эритроциты. Они имеют овальную форму и овальные хорошо окрашенные яд-

ра.

Препарат 2. Митохондрии ( хондриосомы) в эпителиальных клетках кишечника аскариды.

Окраска: по Альтману.

Сначала, используя малое увеличение микроскопа, необходимо найти базальный конец клеток кишечного эпителия, граничащий с соединительной тканью, и апикальный конец, направленный к просвету кишечника. На апикальном конце видна толстая кутикула. Ближе к базальному концу лежит овальное ядро. Преимущественно в апикальной части клеток можно увидеть митохондрии, ок-

3

рашенные в черный цвет. Они имеют вид коротких извитых нитей или палочек. В эпителиальных клетках кишечника они поставляют энергию, заключенную в макроэргических связях АТФ, для осуществления функции всасывания.

Препарат 3. Аппарат Гольджи в нервных клетках спинального ганглия котенка. Окраска: импрегнация серебром по методу К. Гольджи.

При слабом увеличении микроскопа выбрать нервную клетку, вокруг ядра которой хорошо заметна сетчатая структура аппарата Гольджи. При сильном увеличении рассмотреть и зарисовать несколько клеток. Обратить внимание на светлое круглое ядро нервной клетки. В центре ядра видно хорошо окрашенное ядрышко. Вокруг ядра в цитоплазме отметить аппарат Гольджи в виде черных глыбок, петель и изогнутых палочек. Аппарат, или комплекс Гольджи, в клетках выполняет функции модификации белков (связывает их с углеводами, фосфатными и сульфатными группами), формирования клеточной мембраны, образования лизосом.

Препарат 4. Центросомы в яйцеклетке лошадиной аскариды. Окраска: железный гематоксилин.

Препарат представляет собой срез матки лошадиной аскариды. Видны яйцеклетки, лежащие в полости матки. Они находятся на разных стадиях развития. Яйцеклетки окружены оболочкой, внутри которой происходит дробление. Желательно найти яйцеклетку, находящуюся в метафазе, либо в анафазе первого дробления. В это время отсутствует ядерная оболочка, и хромосомы либо располагаются по экватору клетки, либо уже начали движение к полюсам. На этих стадиях на полюсах яйцеклетки видны темные точки, к которым подходят нити веретена деления, от которых радиально отходят волокна, образующие "звезду", или центросферу. Центросферу вместе с расположенными в центре центриолями называют центросомой. В животных клетках центриоли - центры организации микротрубочек веретена деления.

Занятие 2. Клеточные включения

Включения клетки представляют собой отложения веществ, временно выведенных из обмена веществ, или конечных продуктов обмена.

Препарат 1. Секреторные гранулы в клетках Лейдига кожи аксолотля. Окраска: гематоксилин-эозин.

Найти крупные (розового цвета) клетки Лейдига, лежащие близко к поверхностному кожному слою. Эти одноядерные клетки вырабатывают слизь - секрет белковой природы. Они - одноядерные, заполненные гранулами секрета. Зарисовать несколько клеток с гранулами секрета.

4

Препарат 2. Желточные включения в бластомерах амфибии. Окраска: гематоксилин-пикрофуксин.

Трофические белковые включения, то есть в качестве запаса питательных веществ, имеются только в яйцеклетках. Они содержатся в цитоплазме в виде гранул желтка. На препарате оплодотворенная яйцеклетка амфибии начинает дробиться на бластомеры. В их цитоплазме - золотисто-желтого цвета белковые гранулы. Рассмотреть на малом и большом увеличении микроскопа и зарисовать.

Препарат 3. Жировые включения в клетках печени аксолотля. Окраска: осмиевая кислота и кармин.

Рассматривая препарат при малом увеличении, видим в печеночных клетках окрашенные осмием в черный цвет жировые включения. Зарисовываем группу клеток при большом увеличении. Отмечаем клеточные гранулы, круглые ядра красного цвета, желтовато-зеленую цитоплазму и жировые включения в виде шариков, рассеянных по цитоплазме. Между печеночными клетками видны зе- леновато-коричневые пигментные клетки.

Препарат 4. Включения гликогена в печени аксолотля. Окраска: по методу Беста.

Рассмотреть препарат при малом, а потом при большом увеличении. Зарисовать, отметить печеночные клетки, окрашенные в фиолетовый цвет ядра (может быть по два ядра в клетке), цитоплазму с глыбками гликогена ярко-красного цвета.

Препарат 5. Пигментные клетки кожи головастика.

Найти при малом увеличении отросчатые коричневые клетки - меланоциты. При большом увеличении рассмотреть ядро меланоцита и цитоплазму с зернами пигмента меланина коричневого цвета. Зарисовать несколько клеток.

Занятие 3. Эпителиальные ткани

Эпителиальные ткани покрывают тело, выстилают его полости, составляют основной функциональный компонент желез.

Препарат 1. Мезотелий сальника кролика (однослойный плоский эпителий). Окраска: импрегнация серебром с докраской гематоксилином.

Мезотелий - эпителий серозных оболочек, развивающийся из боковых пластинок мезодермы. Отсюда его название.

5

При малом увеличении найти извилистые границы клеток мезотелия. При большом увеличении рассмотреть и зарисовать клетки мезотелия, округлые или слегка овальные ядра (иногда наблюдаются 2-ядерные клетки).

Препарат 2. Низкий эпителий почки кролика (однослойный кубический эпителий).

Окраска: гематоксилин-эозин.

При малом увеличении найти мозговое вещество почки и в нем в виде округлых полостей поперечносрезанные канальцы почки.

При большом увеличении рассмотреть форму клеток в стенках канальцев. Они лежат в один слой и имеют кубическую форму и круглые базофильные яд-

ра.

Зарисовать несколько срезов почечных канальцев.

Препарат 3. Мерцательный эпителий кишечника беззубки (многорядный). Окраска: железный гематоксилин.

Это однослойный эпителий, но клетки его имеют разную высоту. Соответственно и ядра их лежат на разном уровне. Поэтому создается впечатление многослойности.

При малом увеличении рассмотреть расположение эпителия по отношению к другим тканям. При большом увеличении рассмотреть высокие цилиндрические клетки эпителия. Клетки называются мерцательными, так как имеют реснички на апикальных (верхних) поверхностях. Зарисовать эпителий, отметив ядра и реснички клеток.

Препарат 4. Переходный эпителий мочевого пузыря. Окраска: гематоксилин-эозин.

Называется так потому, что его строение меняется с растяжением стенки органа. Выстилает полости органов выделительной системы. Необходимо рас-

смотреть и зарисовать клетки базального, промежуточного и покровного слоев.

Базальный слой состоит из мелких клеток, промежуточный - из крупных грушевидной формы клеток, покровный - из уплощенных клеток.

Препарат 5. Эпителий роговицы коровы (многослойный полиморфный, неороговевающий).

Окраска: гематоксилин-эозин.

При малом увеличении найти эпителий, покрывающий наружную поверхность роговицы. Он построен из трех слоев: базального, слоя шиповатых клеток и плоского. При большом увеличении рассмотреть клеточные слои и зарисовать. Базальный слой состоит из клеток цилиндрической формы с овальными ядрами,

6

расположенными перпендикулярно базальной мембране. Это камбиальный слой, то есть за счет него происходит смена отмирающих клеток. Второй слой состоит из клеток, имеющих заостренные выросты. Ядра их округлые. Наконец, слой плоских клеток, имеющих уплощенные параллельно поверхности эпителия ядра.

Препарат 6. Кожа пальца человека (многослойный полиморфный ороговевающий эпителий).

Окраска: гематоксилин-эозин.

При малом увеличении микроскопа найти эпителий и определить пять слоев клеток. При большом увеличении рассмотреть и зарисовать структуру клеток в слоях. базальный слой состоит из клеток с овальными ядрами, расположенными перпендикулярно мембране (базальной). шиповатый слой состоит из клеток с отростками и округлыми ядрами, зернистый слой состоит из клеток, содержащих базофильные гранулы (фиолетовые). Это зерна белка - кератогиалина. Выше лежит состоящий из плоских клеток блестящий слой. Клетки содержат оксифильный белок элеидин и имеют красный цвет. Наконец, роговой слой клеток, имеющих вид роговых плоских чешуек. Они заполнены роговым веществом - кератином и пузырьками воздуха. Пополнение эпителиальных клеток идет за счет клеток базального слоя.

Препарат 7. Зеленая железа рака (железистый эпителий). Окраска: гематоксилин-эозин.

Зеленые железы - это парные выделительные железы у ракообразных. Они лежат у основания второй пары антенн. На препарате сначала на малом, а затем на большом увеличении рассмотреть железистые эпителиальные клетки. Они кубической формы. С крупными ядрами. По характеру секреции они относятся к апокриновому типу, то есть у них в процессе образования секрета апикальные части разрушаются и входят в состав секрета. Зарисуйте клетки и пузырьки сек-

рета.

Занятие 4. Соединительная ткань

Это группа тканей, развивающихся из мезенхимы и выполняющих опорную, трофическую и защитную функции. Для них характерно наличие хорошо развитых межклеточных структур: волокон и бесструктурного основного вещества.

Препарат 1. Сухожилие теленка в продольном разрезе (плотная волокнистая соединительная ткань).

Окраска: гематоксилин-эозин.

Найти коллагеновые волокна, расположенные параллельно друг другу. Меж-

ду пучками волокон - прослойки рыхлой соединительной ткани (не окрашены).

7

В ней и между волокнами лежат клетки - фибробласты, имеющие темные палочковидные ядра. Зарисовать при большом увеличении микроскопа.

Препарат 2. Подкожная клетчатка крысы (рыхлая соединительная ткань). Окраска: железный гематоксилин.

Такой тип соединительной ткани сопровождает кровеносные сосуды. Состоит из клеток и межклеточного вещества. Межклеточное вещество содержит коллагеновые и эластические волокна. Коллагеновые толще и не ветвятся. Эластические тоньше и могут ветвиться. Из клеточных элементов можно увидеть фибробласты. Крупные неопределенной формы клетки с овальным светлым ядром. гистиоциты имеют темные ядра. Круглое темное ядро и узкий ободок цитоплазмы дает возможность узнать лимфоциты. Зарисовать препарат, отметив указанные элементы ткани.

Препарат 3. Гиалиновый хрящ ребра кролика. Окраска: гематоксилин-эозин.

Такой тип хряща встречается в стенке дыхательных путей, ребрах, на суставных поверхностях костей. Для него характерно большое количество межклеточного вещества. При малом увеличении найти надхрящницу. Она лежит снаружи и в ней много коллагеновых волокон и молодых хрящевых клеток - хондробластов. Сами клетки и их ядра вытянуты. В них есть кровеносные сосуды, которых нет в самом хряще. Глубже располагается межклеточное вещество хряща - гиалин. Оно состоит из хондриновых волокон (на препарате не видны) и основного вещества. В межклеточном веществе лежат хрящевые клетки - хондроциты. Ближе к поверхности они имеют веретеновидную форму, в глубине - овальную и округлые ядра. Группы клеток, лежащие в полостях, называются изогенными группами. Они образовались в результате деления исходной клетки. Рассмотреть и зарисовать строение хряща при большом увеличении микроскопа.

Препарат 4. Берцовая кость человека в поперечном разрезе (костная ткань). Окраска: тионин-пикриновая кислота.

Костная ткань - это форма соединительной ткани, в которой межклеточное вещество обезыствлено. Снаружи лежит надкостница. Она состоит из плотной волокнистой соединительной ткани и молодых костных клеток - остеобластов. В надкостнице много кровеносных сосудов. Остеобласты, выделяя костную ткань и замуровываясь в ней, превращаются в остеоциты. Под надкостницей в несколько рядов располагаются параллельные костные пластинки. Такие же, но внутренние костные пластинки лежат со стороны костного мозга. Остеоциты лежат между пластинками. Они имеют много отростков, проникающих в костные канальцы. В среднем слое костной пластинки видны концентрические костные пластинки, окружающие канал, где проходит кровеносный сосуд. Это

8

образование называется остеоном или гаверсовой системой. Между остеонами располагаются вставочные пластинки.

При малом увеличении рассмотреть общий план строения, а при большом - зарисовать.

Занятие 5. Кровь

Кровь относится к группе соединительных тканей. Состоит она из промежуточного вещества - плазмы и форменных элементов (эритроцитов, лейкоцитов, тромбоцитов).

Препарат: Мазок крови человека. Окраска: по методу Романовского.

Сначала необходимо познакомиться с рисунком мазка крови и нарисовать в альбоме клетки крови. Затем препарат мазка крови помещается на предметный столик микроскопа и микроскопируется с иммерсионной системой. На препарат наносится капля масла. Конденсор поднят до конца. Диафрагма открыта. Объектив × 90 погружают в масло до соприкосновения с препаратом. Затем микровинтом поднимают тубус до получения изображения. Необходимо научиться идентифицировать клетки крови на препарате.

Эритроциты. Их больше других клеток. Имеют правильную округлую форму. Ядро отсутствует.

Нейтрофилы. Размер их 1, 5-2, 0 эритроцита. В цитоплазме фиолетовая зернистость. Юные нейтрофилы имеют ядро бобовидной формы; палочкоядерные имеют ядро в виде петли, подковы или буквы S; сегментоядерные - разделенное на сегменты, соединенные перемычками.

Эозинофилы. Немного крупнее нейтрофилов. В цитоплазме крупные красные зерна. Ядро фиолетовое. Чаще - из двух сегментов.

Базофилы. Размеры такие же, как у нейтрофилов. Ядро неопределенной формы. Фиолетовая зернистость сосредоточена главным образом вокруг ядра.

Лимфоциты. Размер 1, 0-1, 5 эритроцита. Круглое темно-фиолетовое ядро занимает большую часть клетки. Цитоплазма окружает ядро узким ободком.

Моноциты. Наиболее крупные клетки. Размер - 4 эритроцита. Ядро бобовидной формы. Цитоплазма - голубовато-серая.

Тромбоциты (кровяные пластинки). Имеют вид маленьких базофильных телец неопределенной формы. Образуют скопления.

После изучения форменных элементов крови выведем лейкоцитарную формулу, то есть процентное соотношение различных форм лейкоцитов. Для их подсчета чертим в тетради (альбоме) сетку из 100 квадратов (10×10). Пять верхних рядов предназначают для сегментоядерных нейтрофилов, шестой ряд - для палочкоядерных. В следующих трех рядах - лимфоциты. В последнем ряду - эозинофилы и моноциты. Встретившиеся формы лейкоцитов вносим в сетку, обозначая их начальными буквами. Равномерность подсчета достигается передвижени-

9