26 -30 Берова клин.биохим
..docx…воздухом, силиконовые прокладки для герметизации колонок, пробирки с притёртыми пробками на 10 мл, пипетки на 1, 2, 5, 10 мл, пипетки бактериологические, груша резиновая (малая), стеклянные ампулы на 10 и 15 мл, колба Бунзена (см рис.9-10). Липиды эмбриона, по сравнению с остаточным желтком суточных цыплят, характеризуются повышенным содержанием стеариновой, линолевой, линоленовой, эйкозаеновой кислот и пониженным – миристиновой, пентадиеновой и пальмитоолеиновой кислот (табл. 1). В липидах организма птиц…(+)
Распределительная одномерная хроматография свободных аминокислот плазмы крови на бумаге.
В распределительной хроматографии разделение веществ обуславливается различиями в коэффициентах распределения компонентов смеси между двумя несмешивающимися жидкостями – подвижным и неподвижным растворителями. Неподвижный растворитель удерживается бумагой, подвижный – передвигается вдоль бумаги. Хроматографическая бумага в распределительной хроматографии должна быть инертной по отношению к хроматографируемым веществам и подвижному растворителю, но имеющей определённое средство к неподвижному растворителю. Для гидрофильного вещества – бумаги неподвижным растворителем служит вода, подвижным – органический растворитель. Различие в распределении веществ между двумя жидкостями определяет скорость движения компонентов смеси в бумаге и приводит к их разделению. Наибольшей скоростью движения обладает тот компонент смеси, который имеет наименьший коэффициент определения между неподвижным и подвижным растворителями.
Распределение вещества между двумя несмешивающимися жидкостями выражается формулой: Kd=Cs/Ce, где Kd – коэффициент распределения определяемого вещества между неподвижным и подвижным растворителями, Cs – молярная концентрация определяемого компонента в неподвижной фазе, Ce – молярная концентрация определяемого компонента в подвижной фазе. Коэффициент распределения зависит от природы вещества, природы растворителей и температуры.
2 мл свежеполученной плазмы крови лиафилизируют в ампулах в лиофилизаторе. Полученный лёгкий белый порошок лиофилизата экстрагируют солянокислым ацетоном и эфиром. Водный экстракт аминокислот наносят порциями 25 мкл (по 5 мкл) на лист бумаги для разделения аминокислот. Для разделения свободных аминокислот сыворотки и плазмы крови животных применяют как восходящие, так и нисходящие способы одномерной хроматографии. Смесь (?)бутилового спирта: ледяной уксусной кислоты и дистиллированной воды = 4:1:1 пропускать дважды в хроматографической камере определенными насыщенными парами растворителей.
На хроматограммах появляются производные нингидрина и аминокислоот в виде ярко-лиловых пятен (рис.56).
Рис.56. Хроматограмма свободных аминокислот плазмы крови быка-производителя: 1 - цистин; 2 - лизин; 3 - гистидин; 4 - аргинин; 5 - аспарагиновая кислота; 6 – серин; 7 – глицин; 8 – глутаминовая кислота; 9 – треонин; 10 – аланин; 11 – тирозин; 12 – триптофан; 13 – валин; 15 – лейцин. Хроматография получена при двукратном пропускании растворителя 4:1:1 = бутанол: Ac:H2O и трёхкратном – 40:15:5 = (?)бутанол: уксусная кислота: H2O.
У коров, содержащихся на высококонцентратном рационе и страдающих алиментарной токсимией, зимой уровень свободных аминокислот в плазме крови в 1,7 раза ниже, чем у животных малоконцентратного типа кормления.
В качестве камер для распределительной хроматографии аминокислот на бумаге можно использовать сосуды различных форм и размеров, сделанных из материалов, с которыми растворитель не реагирует.
Хроматографические камеры должны герметично закрываться, для того, чтобы в них поддерживалась (?) парами растворителя атмосфера, что предотвращает испарение растворителя с листов хроматографической бумаги. Наиболее удобны стеклянные камеры, так как в них можно следить за движением растворителя. Размер, форма и конструкция хроамтографических камер зависит от специфики исследования.
Для одномерной хроматографии часто используют стеклянные колпаки (при восходящей), а также высокие стеклянные банки с пришлифованной стеклянной крышкой (при нисходящей) диаметром 25 см и больше и высотой 50 см. Для двумерной и одномерной хроматографии можно использовать камеру из парафинированных дубовых досок и стекла. Сверху камеру закрывают крышкой из парафинированных досок.
Фирма Labor (Венгрия) выпускает шкаф типа ОЕ-301.
Специальные стеклянные лодочки используются в камерах для смеси растворителей и помещения краёв хроматографической бумаги с нанесёнными исследуемыми пробами.
Иммунохимические методы: иммуноферментный анализ (ИФА) половых гормонов.
В конце прошлого века (1971- 1972 гг.) был разработан иммуноферментный анализ, в основе которого лежит закон…