Лабораторна робота 3
.pdfЛАБОРАТОРНА РОБОТА 3. БІОТЕХНОЛОГІЯ ОТРИМАННЯ ХЛОРТЕТРАЦИКЛІНУ
(ЗАКІНЧЕННЯ).
Хлортетрациклін є препаратом виключно сільськогосподарським. На його основі випускають препарат Біоміцин (табл. 3.1). Застосування біоміцину викликає зміни у мікрофлорі шлунково-кишкового тракту, зменшується вміст токсино-утворюючих бактерій. Введення невеликих доз біоміцину в кормовий раціон покращує ріст тварин. Препарат ветеринарного призначення для лікування та профілактики захворювань сільськогосподарських тварин і птахів.
Таблиця 3.1.
Основні характеристики готового препарату Біоміцин.
Найменування показників |
Значення |
Масова частка вологи % не більше |
10 |
( за ГОСТ 13496.3-80) |
|
Масова частка залишків після просіювання |
10 |
на ситі з шовкової тканини №21 % не більше |
|
№27 % не більше |
|
Масова частка ХТЦ, г/кг: |
|
фізико-хімічним методом |
80 |
мікробіологічним методом |
80 |
Масова частка вітаміну В12 , мкг/г не менше |
8 |
Не шкідливість при тест-дозі на одну мишу , |
100 |
мг |
|
Зовнішній вигляд |
однорідний, |
|
сипучий |
|
порошок |
Колір |
від світло- |
|
коричневого до |
|
коричневого |
Про закінчення процесу ферментації свідчать наступні показники:
1накопичення хлортетрацикліну до 5000 мг/см3 і більше;
2остаточний вміст ЗРР культуральної рідини – 0.2%;
3остаточний вміст аміачного азоту – 0.001%;
4морфологічний стан міцелію продуцента;
5збільшення рН культуральної рідини до 6.3-6.5;
6зупинення накопичення хлортетрацикліну.
Після ферментації культуральна рідина надходить на стадію відділення міцеліальної маси, яку потім знімають з фільтрів і висушують на парових сушарках. За другим способом культуральну рідину без фільтрації висушують на розпилюючій сушарці. Більша частина ХТЦ знаходиться в міцелії. ХТЦ, який
знаходиться в культуральній рідині, можна осадити при простому підкисленні при рН 7,5-8,0. Товарний препарат одержують висушуванням вологого осаду, який надходить з фільтрпресів.
ХТЦ витримує температуру 100 ºС, тому для його отримання в сухому вигляді сушіння триває 3,5-4години і значення кінцевої вологості препарату 6%. Сушильним агентом є повітря (40-50ºС в стрічкових сушарках, в розпилювальній сушарці температура до 200ºС).
Завдання для виконання студентами Аналіз культуральної рідини після культивування
Культивування триває на качалці протягом 72 год. Накопичення ХТЦ відбувається в міцелії поступово і досягає максимум на 66–72 год культивування.
Відбір проби для визначення активності антибіотика. Для визначення активності антибіотика ХТЦ проводять стерильний відбір проби, дотримуючись усіх правил асептики (10–15 мл разом із міцелієм). До відібраної проби добавляють по краплях стерильний 2 н. розчин соляної кислоти і перевіряють рН універсальним індикатором. Добавлення продовжують доти, поки рН розчину не досягатиме значення 2–2,5.
Пробу після підкислення закривають і залишають на 20 хвилин. За цей час відбувається перехід антибіотика з міцелію, після чого культуральна рідина готова до визначення антибіотичної активності.
Визначення рН культуральної рідини. рН культуральної рідини визначають потенціометрично.
Визначення активності хлортетрацикліну (біоміцину).
а) Колориметричний метод визначення хлортетрацикліну (біоміцину) – див. лабораторну роботу 1.
б) Біологічний метод визначення біоміцину визначають мікробіологічним методом з Escherichia coli 113-3 у якості тест-мікроорганізму
Матеріали та обладнання: ФЕК з набором кювет, рефрактометр, рН-метр, лакмусовий папір, технічні ваги, реактиви для виконання аналізу вмісту редукуючих речовин за Бертраном (див. дод.), азоту амінокислот мідним способом (див. дод.), ХТЦ колориметричним методом. Крім того, на кожну бригаду дві стерильні качалочні колби об’ємом 250 мл, одна пробірка з культурою продуцента ХТЦ S. aureofaciens , вирощеною на скошеному агаризованому середовищі, одна чашка з МПА.