1. Матеріали методичного забезпечення теми

1. Завдання для перевірки вихідного рівня знань, вмінь

1. Поясніть поняття «енергетичний бар’єр», «енергія активації»

2. Механізм впливу ферментів на енергію активації реакцій

3. Фактори, що впливають на швидкість каталізу

4. сучасні уявлення про механізми дії ферментів /теорія проміжних сполук, адсорбційна теорія, теорія ланцюгових процесів/.

5. Механізм утворення фермент-субстратного комплекса

6. Кінетика каталізу. Вплив концентрації ферменту і субстрату на кінетику

7. Рівняння Міхаеліса-Ментен

8. Константа Міхаеліса, її роль у визначенні активності ферментів

2. Зміст лабораторної роботи

Спостереження кінетики дії ліпази на жир молока. Вплив жовчі на активність ліпази

Принцип методу. Швидкість ферментативної реакції можна визначити по кількості субстрату, розщепленого за одиницю часу. Для вивчення кінетики реакції в окремих порціях фермент-субстратної суміші, яка містить жир і ліпазу, визначають кількість утворених кислот через означення проміж часу.Результати визначення виражають графічно. Графік по­казує, що гідроліз жира у перше 15 хвилин інкубації протікає швидко, потім та в кінці зовсім припиняється. Такий хід процесу обумовлений постійним зменшенням кількості субстрату і збільшенням продуктів розщеплення. При додаванні у пробу жовчі ліпаза активується, а гідроліз жиру протікає з більшою швидкістю.

Хід роботи. а) Приготування фермент-субстратної суміші. У 2-х хімічних стаканчика по 50 мл відмірити по 10 мл прокип’яченого розве­деного молока 1: 10 та по 1 мл витяжки з підшлунковой за­лози, яка містить ліпазу. В одну із склянок додати 1 мл води, у другу жовчі. Рі­дину в склянках переміша­ти. Із кожної склянки відіб­рати 2 мл суміші перенести в колби на 50 мл, додати по 1-2 каплі розчину фенолфталеїну, відтитрувати 0,01 н розчином до слабо-рожевого кольору. Відмітити об’єм (мл). Записати в таблицю. б) Інкубація з від­бором проб 15-30-45 хвилин. Залишену в склянці суміш помістити на водяну баню при температурі 37⁰ С. Че­рез кожні 15 хв. відбирати по 2 мл суміші і титрувати 0,01 Н. розчином NaOH. Час титрування та кількість лугу записати в таблицю. в) Графічне зобра­ження гідролізу жиру. З отриманих даних визначення кількості лугу нейтралізованого ки­слотами, що утворилися із молока на різних етапах інкубації, по­будувати графік, відкласти на осі абсцис час інкубації. в хв. (15-45) на осі ординат-об’єм лугу (мл) кожної проби.

Час інкубації (хв.)	Об’єм лугу, витрачений на титрування (мл)
	Проба без жовчі	Проба із жовчу
0
15
30
45

Медико-біологічна оцінка отриманих результатів

В пробі з жовчю гід­роліз жиру протікає швидше, ніж без неї. На підставах оцінки кривих на графіку відмітили у висновках активізу­ючу роль жовчі.

1.3. Запитання для перевірки кінцевого рівня знань

1. Які зміни відбуваються у структурі фермента і субстрата під час реакції

2. Які кінетичні параметри необхідно враховувати при ферментному каталізі

3. Принципи виведення рівняння Міхаеліса-Ментен

4. Побудова графіку рівняння Міхаеліса-Ментен і визначення константи Міхаеліса

5. Принципи побудови графіку Лайнуівера-Берка

6. Визначення за допомогою графіку Лайнуівера-Берка дії конкурентного інгібітора

7. Визначення за допомогою графіку Лайнуівера-Берка дії неконкурентного інгібітора

8. Методи визначення активності ферментів і одиниці активності

1.4 Тестові завдання до теми (вибрати з тестових завдань до модульного контролю)

1.5 Теми для самостійної роботи студентів

1. Роль константи Міхаеліса у визначенні активності ферментів

Наступна тема 6. Ізоферменти, Внутришньоклітинна локалізація ферментів. Використання ферментів у клініці (основи медичної ензимології). Ензимодіагностика, ензимотерапія. Ензимопатії. 2 год

Тема № 6. Ізоферменти, Внутришньоклітинна локалізація ферментів. Використання ферментів у клініці (основи медичної ензимології). Ензимодіагностика, ензимотерапія. Ензимопатії.

Лабораторна робота Демонстрація ензимограм.

Мета заняття:

Студент повинен знати:

- клітинну організацію та взаємозв’язок дії ферментів;

- особливості дії окремих форм ферментів і їх значення в тканинному метаболізмі.

- роль ізоферментних спектрів у метаболізмі і їх значення у ензимодіагностиці

- основи ензимодіагностики та ензимотерапії

- ферментні системи, що ушкоджуються при найбільш розповсюджених ферментопатіях

Студент повинен вміти:

- методом центрифугування виділяти органели клітин та компоненти крові

- зробити припущення про можливу патологію на основі аналізу активності ферментів