Додаткова література:

1. Коротяев А. И., Бабичев С. А. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология: Ученик для мед.вузов. – СПб.: СпецЛит., 2002. - С.

2. Поздеев О.К. Медицинская микробиология / Под ред. акад. РАМН В.И.Покровского. – М.: ГЭОТАР-МЕД, 2001. – С.

3. Медицинская микробиология / Гл.ред. В.И.Покровский, О.К.Поздеев. – М.: ГЭОТАР МЕДИЦИНА, 1998. – С.

Методика проведення практичного заняття

На початку заняття за допомогою тестових завдань викладач перевіряє рівень знань-умінь кожного студента. Потім викладач методом опитування та заповнення карти програмового контролю з‘ясовує ступінь та глибину засвоєння кожним студентом теоретичного матеріалу. Наступний етап роботи – засвоєння студентами методики виконання практичної роботи. Після цього студенти виконують практичну роботу, хід виконання якої контролюється викладачем. При вивченні студентами демонстрацій проводиться їх аналіз, робляться висновки, які заносяться у протокол практичного заняття.

Технологічна карта практичного заняття

Етапи роботи	Години, хвилини	Навчальні посібники	Місце проведення
1. Тестовий контроль початкового рівня знань	10	Тести	Комп‘ютерна кімната
2. Опитування студентів по основним питанням теми.	10	Таблиці, схеми	Кімната для практичних занять
3. Заповнення карт програмованого контролю.	15
4. Виконання практичної частини заняття.	40	Схеми "Мікробіологічна діагностика ентеровірусних інфекцій", діагностичні, лікувально-профілактичні препарати, слайди.
5. Підведення підсумків заняття.	5	Таблиці, схеми

Практична робота студента

1. Провести індикацію вірусу поліомієліту (реакція бляшкоутворення). Написати висновок.

2. Врахувати результати реакції пригнічення бляшкоутворення, яка ставилася з метою ідентифікації віруса поліомієліта (демонстрація). Написати висновок.

3. Врахувати результати реакції нейтралізації для визначення антитіл в сироватці крові хворого (демонстрація). Написати висновок.

4. Переписати імунобіологічні препарати (демонстрація) із вказанням мети і способу їх використання.

5. Оформити протокол і підписати у викладача.

Методичні рекомендації по виконанню практичної роботи

Робота 1

В одношарову культуру ниркових клітин, що вирощена у матраці, внесли дослідний матеріал (випорожнення). Його рівномірно розповсюдили по поверхні моношару культури клітин. Інкубували при 35⁰С 2 тижні.

Віруси поліомієліту цитопатогенно впливають на такі клітини, викликаючі круглоклітинну дегенерацію, інтенсивність якої залежить від інокульованої дози віруса. В результаті цитопатичної дії вірусу на культуру клітин, в моношані з‘являються стерильні плями (бляшки). Якщо такі бляшки спостерігаються, то це свідчить про наявність вірусу у дослідному матеріалі.

Студент повинен зробити оцінку реакції на основі знань про механізм даної реакції, написати висновок у протоколі.

Робота 2

Реакції пригнічення бляшкоутворення, що використовується з метою ідентифікації віруса поліомієліта ставиться наступним чином:

1. Змішують рівні об‘єми розведення вірусу і відповідних розведень імунної сироватки.

2. Інкубують суміш упродовж 30 хвилин при кімнатній температурі.

3. Суміш та контроль (вірус без сироватки) вводять в одношарову культуру клітин, потім покривають шаром агару.

4. Врахування результатів проводять порівнюючи кількість бляшек в досліді та контролі. Реакція вважається позитивною при зниженні кількості бляшек в досліді, у порівнянні з конролем – принцип нейтралізації.

Студент повинен зробити оцінку реакції на основі знань про механізм даної реакції, зарисувати її у протоклі та написати висновок. У висновку студент має вказати за якими ознаками виявлений вірус в культурі клітин, який серовар.

Матеріал, який досліджується	Виділення вірусу		Ідентифікація вірусу
	Дослід	Контроль	Імунні сироватки до поліовірусів типів:	1:10	1:20	1:30	1:40	К
			1 2 3

Робота 3

Реакції нейтралізації для визначення антитіл в сироватці крові хворого заснована на здатності віруса цитопатично діяти на культуру клітин та гальмувати їх розмноження. В результаті цього вихідний червоний колір рідкого середовища 199, в якому вирощують клітини, не змінюється. Якщо ж вірус нейтрализується антитілами, культура клітин розмножується (а значить в результаті метаболізму клітин змінюється рН середовища) і колір середовища 199 зміюється на жовтий.

Для виявлення антитіл необхідний матеріал:

1. культура клітин, придатна для розмноження;

2. вірус поліомієліта (діагностикум);

3. сироватка крові хворого, у якого виявляються антитіла.

Діагностикум змішується з сироваткою крові хворого, з взятої в різних розведеннях, залишається на 1 годину при кімнатній температурі а тотім вноситься в пробірки з культурою клітин. Врахування результатів проби проводиться через 4 – 9 днів. При наявності пробірок з жовтим середовищем становиться знак „+” (реакція позитивна), при наявності червоного середовища – „-” (реакція негативна).