Додаткова література:

1. Коротяев А. И., Бабичев С. А. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология: Ученик для мед.вузов. – СПб.: СпецЛит., 2002. - С.

2. Поздеев О.К. Медицинская микробиология / Под ред. акад. РАМН В.И.Покровского. – М.: ГЭОТАР-МЕД, 2001. – С.

3. Медицинская микробиология / Гл.ред. В.И.Покровский, О.К.Поздеев. – М.: ГЭОТАР МЕДИЦИНА, 1998. – С.

Методика проведення практичного заняття

На початку заняття за допомогою тестових завдань викладач перевіряє рівень знань-умінь кожного студента. Потім викладач методом опитування та заповнення карти програмового контролю з‘ясовує ступінь та глибину засвоєння кожним студентом теоретичного матеріалу. Наступний етап роботи – засвоєння студентами методики виконання практичної роботи. Після цього студенти виконують практичну роботу, хід виконання якої контролюється викладачем. При вивченні студентами демонстрацій проводиться їх аналіз, робляться висновки, які заносяться у протокол практичного заняття.

Технологічна карта практичного заняття

Етапи роботи	Години, хвилини	Навчальні посібники	Місце проведення
1. Тестовий контроль початкового рівня знань	10	Тести	Комп‘ютерна кімната
2. Опитування студентів по основним питанням теми.	10	Таблиці, схеми	Кімната для практичних занять
3. Заповнення карт програмованого контролю.	15
4. Виконання практичної частини заняття.	40	Схеми "Мікробіологічна діагностика грипу", "Мікробіологічна діагностика кору", діагностичні, лікувально-профілактичні препарати, слайди.
5. Підведення підсумків заняття.	5	Таблиці, схеми

Практична робота студента

1. Ознайомитися з бланками-направленнями на дослідження до вірусологічної лабораторії.

2. Дослідити отриману із заражених курячих ембріонів алантоісну рідину на наявність віруса грипу в реакції гемаглютинації. Написати висновок.

3. Врахувати результати ідентифікації виділеного віруса грипу в РГГА (демонстрація). Написати висновок.

4. Оцінити результати РЗК з парними сиворотками крові хворого грипом (демонстрації). Написати висновок.

5. Вивчити та переписати імунобіологічні препарати з демонстрації із вказанням мети та способу їх використання.

6. Оформити протокол і підписати у викладача.

МЕТОДИЧНІ РЕКОМЕНДАЦІЇ

ПО ВИКОНАННЮ ПРАКТИЧНОЇ РОБОТИ

Робота 1.

Направлення

на дослідження до вірусологічної лабораторії

Робота 2. Культивування вірусу грипу проводили в курячому ембріоні, який інфікували матеріалом від хворої людини та інкубували при температурі 37⁰С протягом 48-72 годин. Для виявлення (індикації) вірусу в курячому ембріоні використовують реакцію гемаглютинації (РГА), а для ідентифікації – реакцію гальмування гемаглютинації.

РГА ставиться на склі, стерильною піпеткою вносять інгрідієнти за схемою:

Інгрідієнт/компонент	Дослід	Контроль
Хоріоналантоїсна рідина, що містить вірус	1 крапля	_______
Еритроцити	1 крапля	1 крапля
Фізіологічний розчин	-------	1 крапля
Результат	„+” чи „-” Зарисуйте схематично вигляд досліду	„-” Зарисуйте схематично вигляд досліду

Примітка: Якщо в хоріоналантоїсній рідині міститься вірус грипу, а значить він містився в матеріалі від хворої людини, яким інфікували курячий ембрін, то реакція буде позитивна (гемаглютиніни вірусів склеюють еритроцит) і навпаки, якщо в хоріоналантоїсній рідині немає вірусу, то реакція буде негативна. В контрольній краплі реакція повинна бути завжди негативна.

Студент повинен зробити оцінку реакції на основі знань про механізм даної реакції, зарисувати її у протоклі та написати висновок.

Робота 3. РГГА використовують для типування вірусів на етапі ідентифікації. Вона заснована на блокаді, пригніченні антигенів (гемаглютинінів) вірусів антитілами імунної сироватки, в результаті чого віруси втрачають властивість аглютинувати еритроцити (на дні луночки осад у вигляді „гудзика”).

Студент повинен зробити оцінку реакції, яка поставлена у планшетці. Компонентами реакції є хоріоналантоїсна рідина, що отримана з інфікованого курячого ембріону, протигрипозні типоспецифічні сироватки А0, А1, А2 та фізрозчин. На підставі знань, що аглютинат має вигляд диска з рівними краями, а відсутність аглютинату – диска з зазубреними краями, студент повинен врахувати результат реакції. Результати РГГА для типування вірусу грипу, студент має подати у вигляді таблиці. Вони свідчать про те, що гемаглютинуюча активність досліджуваного віруса нейтралізується типоспецифічною протигрипозною сивороткою А2 в розведеннях 1:20, 1:40, 1:160. Це вказує на те, що досліджуваний вірус відноситься до підтипу А2.

РГГА для типування віруса грипу

Типоспе-цифічні проти- грипозні сироватки	Розведення сироваток					Контроль
	1:10	1:20	1:40	1:80	1:160	сиро-ватки	віруса	ерит- роци-тів
А0	-	+	+++	+++	+++	-	+++	-
	м	а	л	ю	н	о	к
А1	-	++	+++	+++	+++	-	+++	-
	м	а	л	ю	н	о	к
А2	-	-	-	-	-	-	+++	-
	м	а	л	ю	н	о	к

Робота 3. РЗК з парними сиворотками крові хворого грипом (табл.3 ). Сиворотки взяті на самому початку захворення і на 12 – 14-ту добу хвороби. Використані 2-кратні розведення (від 1:10 до 1:160). Як видно з демонстрації, перша сироватка дає позитивний результат в розведеннях 1:10 і 1:20, в той час як друга сиворотка виявляє комплементзв’язуючу активність в розведенні 1:80. Це свідчить про появу в сироватці хворого свіжих антигрипозних антитіл. Зарисуйте дослід в протокол та напишіть висновок.

Результати РЗК з парними сиворотками крові хворого ( 1 і 2 )

при серодіагностиці грипу

Діагностикум	Розведення сироватки					Конт-роль сиро-ватки
	1:10	1:20	1:40	1:80	1:160
Вірус грипу А (Н3N2) 1	+	+	-	-	-	-
2	+	+	+	+	-	-
Вірус грипу В 1	+	-	-	-	-	-
2	+	-	-	-	-	-

Робота 4. Вивчіть анотації, розгляньте препатати, заповніть протоколи.

Протокол 4.1. Препарати для специфічної профілактики і терапії ГРВІ.

Назва препарату

Склад

Показання для використання

Який вид імунітету (за походженням) створюється в організмі після введення?

Протокол 4.2. Препарати для лабораторної діагностики ГРВІ.

Назва препарату

Склад

Показання для використання

В якому методі лабораторного дослідження використовується і на якому етапі?

АНОТАЦІЇ

до діагностичних та лікувально-профілактичних препаратів до теми:: „Ортоміксовіруси. Параміксовіруси. Лабораторна діагностика грипу, парагрипу, РС-інфекції, кору та паротитної інфекції. Лабораторна діагностика короновірусної та аденовірусної інфекції.”

Діагностикум еритроцитарний коровий антигенний. Використовується для серодіагностики кору в РГГА.

Типоспецифічні грипозні сиворотки: НОN1, H1N1, H2N2, H3N3, B і С. Містить антитіла до одного з серотипів вірусу парагрипа. Використовуються для ідентифікації та визначення типової приналежності (серотипування) вірусів грипу. Можуть бути використані в реакції гальмування гемаглютинації (РГГА) та в реакції зв‘язування комплементу (РЗК).

Типоспецифічні парагрипозні сиворотки. Містить антитіла до одного з серотипів вірусу парагрипа. Використовуються для ідентифікації та визначення типової приналежності (серотипування) вірусів парагрипу. Можуть бути використані в реакції гальмування гемаглютинації (РГГА) та в реакції нейтралізації (РН).

Сухі типоспецифічні грипозні діагностикуми. Уявляє собою алантоїсну рідину курячих ембріонів, що містить інактивований вірус грипа та вусушену під вакуумом. Діагностикуми є штамоспецифічними. Готуються окремо для кожного типу вірусу грипа А (Н0N1), A₁ (H1N1), A₂ (H2N2, H3N2 і т.і.), В, С. Використовуються для постановки РГГА при визначенні кількості антитіл (серодіагностики) в сироватках крові людей, при визначенні приросту антитіл в парних сироватках людей, що перехворіли грипом або імунізовані проти грипу.

Жива грипозна вакцина. Готується із алантоїсної рідини курячих ембріонів, інфікованих вакцинними штамами віруса грипу основних серотипів. Вакцину вводять через ніс або через рот. Використовують для специфічної профілактики грипу за епідпоказникам.

Інактивована грипозна вакцина містить вбиті віріони вакцинного штаму вірусу грипу. Використовується для створення активного імунітету за епідеміологічними показниками. Вводиться інтраназально.

Хімічна грипозна вакцина містить антигени вірусу грипу, що мають імуногенні властивості. Використовується для профілактики за епідеміологічними показниками. Вводиться на слизову носу.

Лікувально-профілактична полівалентна грипозна сиворотка. Отримана шляхом гіперімунізації коней вірусами грипу різних серотипів. Містить антитіла проти різних серотипів вірусу грипу. Застосовується інтраназально з метою профілактики і лікування грипу на початку захворювання.

Протигрипозний донорський імуноглобулін. Готується із сиворотки крові донорів, імунізованих живою грипозною вакциною типів А і В. Використовується для прфілактики і лікування грипу в епідемічних вогнищах.

Вакцина корова жива. Готується із атенуйованого штаму віруса кору. Використовується внутрішньом’язево для планової специфічної профілактики.

Протикоровий імуноглобулін – препарат отриманий з крові людини (донорської, плацентарної, абортивної) шляхом фракціонування. Містить антитіла різної специфічності, в тому числі до вірусу кору, що виникають в результаті захворювання на кір в дитячому віці. Використовується для серопрофілактики захворювання.

Жива поротитна вакцина містить атенуйований штам вірусу паротиту. Використовується для планової та ектреної профілактики.

Людський лейкоцитарний інтерферон. Родина білків різного призначення, продукованих лейкоцитами людини у відповідь на антигенну стимуляцію. Противірусною активністю володіє -інтерферон. На даний час проводиться за допомогою рекомбінантної технології. Використовують для профілактики та лікування грипу та інших вірусних респіраторних захворювань.

Ремантадин - хіміопрепарат адамантанового ряду, інгібуючий окремі стадії біосинтезу віруса грипу в клітинах хазяїна. Призначається для профілактики та лікування грипа в перші 2 доби захворювання.