
- •Заняття 1 Тема. Правила роботи у бактеріологічній лабораторії. Морфологія бактерій. Світлова мікроскопія з використанням імерсійного об‘єктиву. Прості методи фарбування препаратів
- •Теоретичні питання
- •Практична робота студентів
- •Алгоритм практичної роботи
- •Правила роботи в навчальній бактеріологічній лабораторії на кафедрі мікробіології
- •Демонстрація
- •1 Бактеріологічний посуд: бактеріологічна петля, чашка Петрі, пробірки, градуйовані піпетки, колби
- •2 Предметні та покривні скельця. Скельця з лунками. Спиртівка.
- •3 Мікроскоп. Імерсійна олія
- •4 Пневмококи та менінгококи під мікроскопом
- •Приклади тестових завдань
- •Технологічна карта заняття
- •Додаток а (довідковий) пояснення до самостійної роботи з теми
4 Пневмококи та менінгококи під мікроскопом
При розгляданні та зарисовці препаратів зверніть увагу на форму та розміщення коків. Ці мікроорганізми в препараті розміщуються по два.
5 Набір барвників, таких, що застосовуються в бактеріологічних лабораторіях для фарбування препаратів.
Для вивчення тинкторіальних властивостей мікроорганізмів (відношення до барбників) та їх морфології використовують анілінові барвники (лужні, кислі та нейтральні). Найчастіше застосовують лужні барвники: метиленовий синій, основний фуксин, генціанвіолет, кристалічний фіолетовий, везувін, хризоідин та ін. Рідше використовуються нейтральні (нейтральний червоний) та кислі (еозин) барвники. З названих барвників готують спиртові та водні розчини, у деяких випадках для підвищення забарвлюваної сили розчину до нього додають протрави, наприклад, карболову кислоту, луги та ін.
Фарбування мікроорганізмів має велике діагностичне значення, оскільки дає змогу встановити морфологічні та тинкторіальні особливості бактерії, чого в деяких випадках достатньо для постановлення мікробіологічного діагнозу. Фарбування мікроорганізмів являє собою складний фізико-хімічний процес, в механізмі якого суттєву роль відіграють адсорбція, капілярність, хімічна спорідненість між барвником та об'єктами, що фарбуються, а також рН середовища, в якому вони перебувають.
Основні барвники складаються із фарбувального катіона та безбарвного аніона. Під час дисоціації таких барвників пофарбований катіон, який звільнюється, з'єднується зі структурами бактерії, що характеризуються кислотними властивостями, в результаті утворюються солі. Якщо барвник характеризується кислими властивостями, то забарвлювальна частина його молекули, яка заряджена негативно, буде утворювати солі та сполуки з речовинами, що мають основні властивості.
Бактерії наділені поверхневим негативним зарядом, в яких вміщені сполуки кислої природи (нуклеїнові кислоти), тому основні барвники характеризуються більшою спорідненістю до бактерій, ніж кислі барвники, і широко застосовуються у мікробіології. Кислі барвники частіше застосовуються для фарбування фону препарату в контрастні кольори.
Живі нефіксовані мікроорганізми фарбуються значно складніше, ніж ті самі мікроорганізми, що фіксовані різними способами. Клітинна стінка і цитоплазматична мембрана обмежують можливість проникнення барвників всередину клітини. Фарбування відбувається лише після того, як у результаті дії самого барвника порушується проникність стінки і цитоплазматичної мембрани.
Приклади тестових завдань
1 Які критерії покладено в основу класифікації бактерій?
*А. Одна або декілька властивостей, що швидко і легко виявляються.
В. Патогенність: патогенні види групують в окремі від непатогенних бактерій роди
С. Структура клітинної стінки.
Д. Еволюційне походження організму.
2 За якою ознакою живі істоти об‘єднуються під загальною назвою – мікроорганзіми?
*А. За малими розмірами.
Б. За обгатним паразитизмом.
В. За типом дихання.
Г. За типом живлення.
Д. За місцем локалізації у зовнішньому середовищі.
3 Які форми бактерій Ви знаєте?
А. Кокоподібні бактерії.
В. Паличкоподібні (циліндричні) форми бактерій.
С. Звивисті (спіралеподібні) бактерії.
Д. Ниткоподібні форми бактерій.
*Е. Всі вищеперелічені.
4 Назвіть форму і особливості взаємного розміщення клітин у мазках з культур: 1 – стафілококів; 2 – тетракоків; 3 – менінгококів; 4 – стрептококів; 5 – пневмококів; 6 – бактерій; 7 – стрептобацил.
У відповіді суміщуйте цифрові та літерні індекси.
А. Паличкоподібна форма, розміщені поодинці.
В. Сферична форма, розміщені тетрадами.
С. Сферична форма, розміщені ланцюжками.
Д. Сферична форма, розміщені неправильними скупченнями (у вигляді грон винограду).
Е. Паличкоподібна форма, розміщені ланцюжками.
F. Ланцетоподібна форма, розміщені попарно.
G. Сферична форма, розміщені пакетами (тюками).
Відповіді: 1Д; 2B; 3F; 4С; 5F; 6A; 7E
5 З якою метою проводять простий метод забарвлення препаратів мікроорганізмів на склі з подальшим мікроскопіюванням?
A. Для збільшення контрастності.
B. Для визначення хвороботворності збудника.
*С. Для визначення морфології збудника.
D. Для визначення метода лікування захворювання.
6 Що таке вид бактерій?
*А. Це сукупність мікроорганізмів, які мають подібні морфологічні, фізіологічні та молекулярно-біологічні ознаки, подібний обмін речовин та спільне походження.
Б. Культура бактерій, виділена з конкретного джерела.
В. Потомство однієї бактеріальної клітини.
Г. Бактерії, що відрізняються незначними фізіологічними ознаками.
Д. Всі відповіді правильні.
7 Які препарати використовуються для дослідження живих мікроорганізмів?
*А. „Висяча” крапля.
*В. „Розчавлена” крапля.
С. Фіксовані мікропрепарати з різних культур
Е. Всі вищепереличені
8 На які групи поділяють бактерії за формою?
*А. Коки, паличкоподібні, звивисті, нитчасті.
Б. Тільки на коки, паличкоподібні.
В. Тільки на звивисті, нитчасті.
Г. Тільки на коки, нитчасті.
Д. Тільки на паличкоподібні, звивисті.
9 Що таке моновар?
*А. Бактерії одного виду, що відрізняються морфологічними ознаками.
Б. Бактерії одного виду, що відрізняються фізіологічними ознаками.
В. Бактерії одного виду, що відрізняються антигенними ознаками.
Г. Бактерії одного виду, що відрізняються хімічними ознаками.
Д. Бактерії одного виду, що відрізняються відношенням до фагів.
10 У зв‘язку з малими розмірами мікроорганізмів для їх морфологічного дослідження використовують різні види мікроскопії: 1 – світлову, 2 – люмінесцентну, 3 – темнопільну, 4 – фазово-контрастну, 5 – електронну.
Назвіть принципи, на яких вони грунтуються (у відповіді суміщуйте цифрові та літерні індекси).
А. Проходження світлових променів через ряд збільшувальних лінз.
В. Здатність світитися під дією ультрафіолетових променів.
С. Дифракція при боковому освітленні завислих в рідині частинок.
Д. Перетворення фазових різниць в амплітудні при проходженні через об‘єкти.
Е. Використання електронів замість світлових променів.
Назвіть призначення кожного виду мікроскопії.
F. Дослідження фіксованих та пофарбованих мазків у світлому полі.
G. Дослідження непофарбованих препаратів з живими мікроорганізмами.
H. Дослідження препаратів, які оброблені барвниками-флюорохромами.
Відповіді: 1А,F; 2В,H; 3С,G; 4Д,G; 5Е